15 原理

试样经过离心、脱脂、过滤，滤液经含有黄曲霉毒素M1特异性单克隆抗体的免疫亲和柱层析净化, 黄曲霉毒素M1交联在层析介质中的抗体上。此抗体对黄曲霉毒素M1具有专一性，当样品通过亲和柱时, 抗体选择性的与所有存在的黄曲霉毒素M1 (抗原)键合。用甲醇-水(1+9)将免疫亲和柱上杂质除去，以 甲醇—水(8+2)通过免疫亲和柱洗脱，将溴溶液衍生启的洗脱液置于荧光光度计中测定黄曲霉毒素M₁含量。

16 试剂和材料

除非另有规定，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。

16.1 甲醇(CH₃OH):色谱纯。

16.2 氯化钠(NaCl)。

16.3 甲醇—水(1+9):取10mL甲醇加入90mL水。

16.4 甲醇—水(8+2):取80mL甲醇加入20mL水。

16.5 溴溶液储备液(0.01%):称取适量溴，溶于水后，配成0.01%的储备液，避光保存。

16.6 溴溶液工作液(0.002%):取10mL 0.01%的溴溶液储备液加入40mL水混匀，于棕色瓶中保存备 用。现用现配。

16.7 二水硫酸奎宁[(C₂₀H₂₄N₂O₂)₂H₂SO₄·2H₂O]。

16.8 硫酸溶液(0.05mol/L):取2.8mL浓硫酸，缓慢加入适量水中，冷却后定容至1000 mL。

16.9 荧光光度计校准溶液:称取0.340g二水硫酸奎宁，用0.05mol/L硫酸溶液(16.8)溶解并定容至100mL,此溶液荧光光度计读数相当于2.0ug/L黄曲霉毒素M1标准溶液。0.05mol/L硫酸溶液(16.8)荧光 光度计读数相当于0.0 ug/L黄曲霉毒素M1。

17 仪器和设备

17.1 荧光光度计。

17.2 离心机：转速≥7000转/分钟。

17.3 玻璃纤维滤纸:直径11cm,孔径1.5um。

17.4 黄曲霉毒素M1免疫亲和柱。

17.5 空气压力泵。

17.6 玻璃试管:直径12 mm,长75 mm,无荧光特性。

17.7 玻璃注射器：10mL。

18 分析步骤

18.1 试样提取

18.1.1 乳：取50.0 mL试样，加入1.0g氯化钠(16.2) , 7000转/分钟下离心10 min,小心移取用于分 析的乳底脱脂层，不要碰触顶部脂肪层，将脱脂的乳以玻璃纤维滤纸(17.3)过滤，滤液备用。

18.1.2 乳粉：称取5g试样(精确至0.01g),用30℃～60℃水将其慢慢溶解，定容至50 mL,加入1.0g 氯化钠(16.2),以下按18.2的步骤操作。

18.2 净化

将免疫亲和柱(17.4)连接于10 mL玻璃注射器(17.7)下。准确移取10.0mL上述滤液(18.1)注 入玻璃注射器中，将空气压力泵(17.5)与注射器连接，调节压力使溶液以约6mL/min流速缓慢通过免 疫亲和柱(17.4),直至2 mL～3 mL空气通过柱体。以10 mL甲醇—水(1+9)(16.3)清洗柱子两次， 弃去全部流出液，并使2 mL～3mL空气通过柱体。准确加入1.0 mL(V1)甲醇—水(8+2)(16.4)洗脱 液洗脱，流速为1 ml/min～2mL/min,收集全部甲醇-水洗脱液于玻璃试管(17.6)中，备用。

18.3 测定

18.3.1 荧光光度计校准

在激发波长360nm,发射波长450nm条件下，以0.05mol/L的硫酸溶液(16.8)为空白，调节荧光 光度计的读数值为0.0ug/L；以荧光光度计校准溶液(16.9)调节荧光光度计的读数值2.0ug/L。

18.3.2 样液测定

取上述洗脱液加入1.0mL(V)0.002%溴溶液，1min后立即于荧光光度计测定样液中黄曲霉毒素 M₁含量C₁。

18.3.3 空白试验

用水代替试样，按18.1～18.3步骤做空白试验。

相关链接：乳和乳制品中黄曲霉毒素M1的测定—免疫亲和层析净化高效液相色谱法（三）

文章来源：《食品安全国家标准汇编检验方法（一）》

版权与免责声明：转载目的在于传递更多信息。

如其他媒体、网站或个人从本网下载使用，必须保留本网注明的"稿件来源"，并自负版权等法律责任。

如涉及作品内容、版权等问题，请在作品发表之日起两周内与本网联系，否则视为放弃相关权利。