12 分析步骤

12.1 试样制备

12.1.1 样品提取

取50g试样，经粉碎机粉碎，-20℃冷冻保存。准确称取试样2g(精确到0.001g),加入10.0mg/L ¹³C₃-丙烯酰胺内标溶液10uL(或20uL),相当于100ng(或200ng)的¹³C₃-丙烯酰胺内标，再加入超纯水10mL,振荡30min后，于4000r/m离心10min,取上清液备用。

12.1.2 样品净化

在试样提取的上清液中加入硫酸铵15g,振荡10min,使其充分溶解，于4000r/m离心10min,取上清液10mL,备用。如上清液不足10mL)则用饱和硫酸铵补足。取洁净玻璃层析柱，在底部填少许玻璃棉，压紧，依次填装无水硫酸钠10g、EXtreIut™20硅藻土2g。称取5gEXtrelut™20硅藻土与上述备用的试样上清液搅拌均匀后，装入层析柱中。用70mL正己烷淋洗，控制流速为2mL/min,弃去正己烷淋洗液。用70mL乙酸乙酯洗脱，控制流速为2mL/min,收集乙酸乙酯洗脱溶液，并在45℃水浴下减压旋转蒸发至近干，用乙酸乙酯洗涤蒸发瓶残渣三次(每次1mL),并将其转移至已加入1mL超纯水的试管中，涡旋振荡。在氮气流下吹去上层有机相后，加入1mL正己烷，涡旋振荡，于3500r/m离心5min,取下层水相备用衍生。

12.1.3 衍生

试样的衍生：在试样提取液中加入溴试剂1mL,涡旋振荡，4℃放置至少1h后，加入0.1mol/L硫代硫酸钠溶液约100uL,涡旋振荡除去剩余的衍生剂；加入2mL乙酸乙酯，涡旋振荡1min,于4000r/m离心5min,吸取上层有机相转移至加有0.1g无水硫酸钠的试管中，加入乙酸乙酯2mL重复萃取，合并有机相；静置至少0.5h,转移至另一试管，在氮气流下吹至近干，加0.5mL乙酸乙酯溶解残渣(注意：根据仪器的灵敏度，调整溶解残渣的乙酸乙酯体积，通常情况下，釆用串联质谱仪检测，其使用量为0.5mL,采用单级质谱仪检测，其使用量为0.1mL。),备用。

标准系列溶液的衍生：量取标准系列溶液各1.0mL,按照上述试样衍生方法同步操作。

13 仪器参考条件

13.1 色谱条件

色谱柱：DB-5ms柱(30m×0.25mmI.D.×0.25um)或等效柱。

进样口温度：120℃保持2min,以40℃/min速度升至240℃,并保持5min。

色谱柱程序温度:65℃保持1min,以15℃/min速度升至200℃,再以40℃/min的速度升至240℃,并保持5min。

载气：高纯氨气(纯度＞99.999%),柱前压为69mPa,相当于10PSi。

不分流进样，进样体积luL。

13.2 质谱参数

检测方式：选择离子扫描(SIM)采集。

电离模式：电子轰击源(EI),能量为70eV。

传输线温度：250℃。

离子源温度：200℃。

溶剂延迟：6min；质谱采集时间：6min～12min。

丙烯酰胺监测离子为m/z106∖133、150和152,定量离子为m/z150。

¹³C₃-丙烯酰胺内标监测离子为m/z108、136、153和155,定量离子为m/z155。

13.3 标准曲线的制作

将衍生的标准系列工作液分别注入气相色谱-质谱系统，测定相应的丙烯酰胺及其内标的峰面积，以各标准系列工作液的丙烯酰胺进样浓度(ug/L)为横坐标，以丙烯酰胺及其内标¹³C₃丙烯酰胺定量离子质量色谱图上测得的峰面积比为纵坐标，绘制线性曲线。

13.4 试样溶液的测定

将衍生的试样溶液注入气相色谱-质谱系统中，得到丙烯酰胺和内标¹³C₃丙烯酰胺的峰面积比，根据标准曲线得到待测液中丙烯酰胺进样浓度(ug/L),平行测定次数不少于两次。

13.5 质谱分析

分别将试样和标准系列工作液注入气相色谱-质谱仪中，记录总离子流图和质谱图及丙烯酰胺和内标的峰面积，以保留时间及碎片离子的丰度定性，要求所检测的丙烯酰胺色谱峰信噪比(S/N)大于3,被测试样中目标化合物的保留时间与标准溶液中目标化合物的保留时间一致，同时被测试样中目标化合物的相应监测离子丰度比与标准溶液中目标化合物的色谱峰丰度比一致,允许的偏差见表1。

14 分析结果的表述

采用内标法，按公式(1)计算试样中丙烯酰胺含量。

计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留三位有效数字(或小数点后1位)。

15 精密度

在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的20%。

16 其他

方法定量限为10ug/kg。

相关链接：食品中丙烯酰胺的测定—稳定性同位素稀释的气相色谱-质谱法（一）

文章来源：《食品安全国家标准汇编检验方法（一）》

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