5 仪器和设备

5.1 高型无导流口烧杯：400mL或600mL。

5.2 坩埚：具粗面烧结玻璃板,孔径40um～60um。清洗后的坩埚在马弗炉中525℃±5℃灰化6h,炉温降至130℃以下取出，于重铬酸钾洗液中室温浸泡2h,用水冲洗干净，再用15mL丙酮冲洗后风干。用前,加入约1.0g硅藻土，130℃烘干,取出坩埚，在干燥器中冷却约1h,称量,记录处理后坩埚质量(mG),精确到0.1mg。

5.3 真空抽滤装置:真空泵或有调节装置的抽吸器。备1 L抽滤瓶,侧壁有抽滤口，带与抽滤瓶配套的橡胶塞,用于酶解液抽滤。

5.4 恒温振荡水浴箱:带自动计时器,控温范围室温5℃～100℃,温度波动±1℃。

5.5分析天平:感量0.1mg和1mg。

5.6 马弗炉：525℃±5℃。

5.7 烘箱：130℃±3℃。

5.8 干燥器:二氧化硅或同等的干燥剂。干燥剂每两周130℃±3℃烘干过夜一次。

5.9 PH计:具有温度补偿功能,精度±0.1。用前用PH 4.0、7.0和10.0标准缓冲液校正。

5.10 真空干燥箱：70℃±1℃。

5.11 筛:筛板孔径0.3mm～0.5mm。

6 分析步骤

6.1 试样制备

注：试样处理根据水分含量、脂肪含量和糖含量进行适当的处理及干燥,并粉碎、混匀过筛。

6.1.1 脂肪含量<10%的试样

若试样水分含量较低(<10%)),取试样直接反复粉碎,至完全过筛。混匀,待用。若试样水分含量较高(≥10%)),试样混匀后,称取适量试样(mc,不少于50g),置于70℃±1℃真空干燥箱内干燥至恒重。将干燥后试样转至干燥器中，待试样温度降到室温后称量(mD)。根据干燥前后试样质量,计算试样质量损失因子(f)。干燥后试样反复粉碎至完全过篇,置于干燥器中待用。

注：若试样不宜加热,也可采取冷冻干燥法。

6.1.2 脂肪含量≥10%的试样

试样需经脱脂处理。称取适量试样(mc,不少于50g),置于漏斗中，按每克试样25mL的比例加入石油醚进行冲洗,连续3次。脱脂后将试样混匀再按6.1.1进行干燥、称量(mD),记录脱脂、干燥后试样质量损失因子(f)。试样反复粉碎至完全过筛,置于干燥器中待用。注；若试样脂肪含量未知，按先脱脂再干燥粉碎方法处理.

6.1.3 糖含量≥5%的试样

试样需经脱糖处理。称取适量试样(mc,不少于50g),置于漏斗中，按每克试样10mL的比例用85%乙醇溶液冲洗,弃乙醇溶液,连续3次。脱糖后将试样置于40℃烘箱内干燥过夜,称量(mD),记录脱糖、干燥后试样质量损失因子(f)。干样反复粉碎至完全过筛，置于干燥器中待用。

6.2 酶解

6.2.1 准确称取双份试样(m)，约1g(精确至0.1mg),双份试样质量差≤0.005g。将试样转置于400mL～600mL高脚烧杯中，加入0.05mol/L MES-TRlS缓冲液40mL,用磁力搅拌直至试样完全分散在缓冲液中。同时制备两个空白样液与试样液进行同步操作,用于校正试剂对测定的影响。

注：搅拌均匀，避免试样结成团块，以防止试样酶解过程中不能与酶充分接触。

6.2.2 热稳定α-淀粉酶酶解：向试样液中分别加入50uL热稳定a-淀粉酶液缓慢搅拌,加盖铝箔,置于95℃～100℃恒温振荡水浴箱中持续振摇，当温度升至95℃开始计时，通常反应35min。将烧杯取出，冷却至60℃,打开铝箔盖,用刮勺轻轻将附着于烧杯内壁的环状物以及烧杯底部的胶状物刮下，用10 mL水冲洗烧杯壁和刮勺。

注：如试样中抗性淀粉含量较高(＞40%),可延长热稳定α-淀粉酶酶解时间至90 min,如必要也可另加入10mL二甲基亚砜帮助淀粉分散。

6.2.3 蛋白酶酶解:将试样液置于60℃±1℃水浴中，向每个烧杯加入100uL蛋白酶溶液,盖上铝箔， 开始计时,持续振摇,反应30 min。打开铝箔盖,边搅拌边加入5 mL 3 mol/L乙酸溶液,控制试样温度 保持在60℃±1℃。用1 mol/L氢氧化钠溶液或1 mol/L盐酸溶液调节试样液PH至4.5±0.2。

注：应在60℃±1℃时调pH,因为温度降低会使PH升高。同时注意进行空白样液的PH测定，保证空白样和试 样液的PH一致。

6.2.4 淀粉葡糖苷酶酶解:边搅拌边加入100 uL淀粉葡萄糖苷酶液，盖上铝箔,继续于60℃+ 1℃水 浴中持续振摇，反应30 min。

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文章来源：《食品安全国家标准汇编检验方法（一）》

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