1 范围

本标准规定了食品中叶酸的测定方法。

本标准适用于食品中叶酸的测定。

2 原理

叶酸是鼠李糖乳杆菌Lactobacilluscaseispp.rhamnosus(ATCC 7469)生长所必需的营养素，在一定控制条件下,将鼠李糖乳杆菌液接种至含有试样液的培养液中，培养一段时间后测定透光率(或吸光度值)，根据叶酸含量与透光率(或吸光度值)的标准曲线计算出试样中叶酸的含量。

3 试剂和材料

注：除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T 6682规定的二级水。

3.1 试剂

3.1.1 盐酸(HCI)。

3.1.2 氢氧化钠(NaOH)。

3.1.3 氯化钠(NaCl)。

3.1.4 十二水合磷酸钠(Na₃PO₄∙12H₂O)。

3.1.5 七水合磷酸氢二钠(Na₂HPO₄∙7H₂O)。

3.1.6 磷酸氢二钾(K₂HPO₄)。

3.1.7 三水合磷酸二氢钾(KH₂PO₄∙3H₂O)。

3.1.8 七水合硫酸镁(MgSO₄∙7H₂O)。

3.1.9 七水合硫酸亚铁(FeSO₄∙7H₂O)。

3.1.10 一水合硫酸锰(MnSO₄∙H₂O)。

3.1.11 三水合乙酸钠(CH₃CooNa∙3H₂O)。

3.1.12 葡萄糖(C₆H₁₂O₆)。

3.1.13 抗坏血酸(C₆H₈O₆)。

3.1.14 甲苯(C₇H₈)。

3.1.15 无水乙醇(C₂H₆O)。

3.1.16 鸡胰腺干粉:含γ-谷胺酰基水解酶。

3.1.17 木瓜蛋白酶：酶活力≥5U/mg。

3.1.18 α-淀粉酶：酶活力≥1.5U/mg。

3.1.19 蛋白胨:含氮量≥10%。

3.1.20 酵母提取物(干粉)：含氮量≥10%。

3.1.21 琼脂。

3.2 试剂配制

3.2.1 磷酸缓冲液(0.05mol/L,pH6.8):分别称取4.35g十二水合磷酸钠和10.39g七水合磷酸氢二钠，用水溶解并稀释至1L,混匀。加入2mL甲苯,室温保存。临用前按大约5mg/mL的比例加入抗坏血酸作为叶酸保护剂，加入量以PH达到6.8为宜。

3.2.2 乙醇溶液(20%,体积分数)：量取200mL无水乙醇与800mL水混匀。

3.2.3 氢氧化钠乙醇溶液(0.01mol/L):称取0.4g氢氧化钠,用乙醇溶液溶解并稀释至1L,混匀。

3.2.4 氢氧化钠溶液(1mol/L):称取40g氢氧化钠，加水溶解并稀释至1L,混匀。

3.2.5 盐酸溶液(1mol/L):量取83.3mL盐酸,用水稀释至1L,混匀。

3.2.6 盐酸浸泡液:量取100mL盐酸与50倍水混合。

3.2.7 鸡胰腺溶液:称取100mg鸡胰腺干粉,加入20mL磷酸缓冲液,摇匀。现用现配。

3.2.8 蛋白酶-淀粉酶液:分别称取200mg木瓜蛋白酶和α-淀粉酶，加入20mL磷酸缓冲液研磨至匀浆,3000r/min离心5min。现用现配。

3.3 培养基

3.3.1 甲盐溶液:分别称取25g磷酸氢二钾和25g三水合磷酸二氢钾，加水溶解并稀释至500mL,混匀。加入1mL甲苯,2℃～4℃冰箱可保存1年。

3.3.2乙盐溶液:分别称取10g七水合硫酸镁、0.5g氯化钠、0.5g七水合硫酸亚铁和0.5g一水合硫酸锰,加水溶解并稀释至500mL。加5滴盐酸，于2℃～4℃冰箱可保存1年。

3.3.3 琼脂培养基:按表1称量或吸取各试剂，加水至100mL,混合,沸水浴加热至琼脂完全溶化。趁热用1mol/L盐酸溶液和1mol/L氢氧化钠溶液调节PH至6.8+0.1。尽快分装,根据试管内径粗细加入3mL~5mL,液面高度不得低于2cm。塞上棉塞，121℃(0.10MPa～0.12MPa)高压灭菌15min。试管取出后直立放置,待冷却后于冰箱内保存,备用。

表1 菌种储备用琼脂培养基配制一览表

3.3.4 叶酸测定用培养液:可直接由试剂公司购买效力相当的叶酸测定用培养基,用前按说明书配制。

相关链接：食品中膳食纤维的测定（三）

文章来源：《食品安全国家标准汇编检验方法（一）》

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