5 大肠埃希氏菌MPN计数(第一法)

5.1 检验程序

大肠埃希氏菌MPN计数的检验程序见图1。

图1 大肠埃希氏菌MPN计数法检验程序

5.2 操作步骤

5.2.1 样品的稀释

5.2.1.1 固体和半固体样品：称取25g样品，放入盛有225mL磷酸盐缓冲液的无菌均质杯内，8000r/min～10000r/min均质1min～2min,制成1:10样品匀液，或放入盛有225mL磷酸盐缓冲液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min～2min制成1:10的样品匀液。

5.2.1.2 液体样品：以无菌吸管吸取25mL样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液的无菌锥形瓶(瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)中.充分混匀，制成1:10的样品匀液。

5.2.1.3 样品匀液的PH值应在6.5～7.5之间，必要时分别用1mol/L NaOH或1mol/L HCl调节。

5.2.1.4 用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1mL,沿管壁缓缓注入9mL磷酸盐缓冲液的无菌试管中(注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面)，振摇试管或换用1支1mL无菌吸管或吸头反复吹打，使其混合均匀，制成1:100的样品匀液。

5.2.1.5 根据对样品污染状况的估计，按上述操作，依次制成10倍递增系列稀释样品匀液。每递增稀释1次，换用1支1mL无菌吸管或吸头。从制备样品匀液至样品接种完毕，全过程不得超过15min。

5.2.2 初发酵试验

每个样品，选择3个适宜的连续稀释度的样品匀液(液体样品可以选择原液)，每个稀释度接种3管月桂基硫酸盐胰蛋白胨(LST)肉汤每管接种1mL(如接种量超过1mL,则用双料LST肉汤)，36℃±1℃培养24h±2h,观察小倒管内是否有气泡产生，24h±2h产气者进行复发酵试验，如未产气则继续培养48h±2h°产气者进行复发酵试验。如所有LST肉汤管均未产气，即可报告大肠埃希氏菌MPN结果。

5.2.3 复发酵试验

用接种环从产气的LST肉汤管中分别取培养物1环，移种于已提前预温至45℃的EC肉汤管中，放入带盖的44.5℃±0.2℃水浴箱内。水浴的水面应高于肉汤培养基液面，培养24h±2h,检查小倒管内是否有气泡产生，如未有产气则继续培养至48h±2h。记录在24h和48h内产气的EC肉汤管数。如所有EC肉汤管均未产气，即可报告大肠埃希氏菌MPN结果；如有产气者，则进行EMB平板分离培养。

5.2.4 伊红美蓝平板分离培养

轻轻振摇各产气管，用接种环取培养物分别划线接种于EMB平板，36℃±1℃培养18h～24h。观察平板上有无具黑色中心有光泽或无光泽的典型菌落。

5.2.5 营养琼脂斜面或平板培养

从每个平板上挑5个典型菌落，如无典型菌落则挑取可疑菌落。用接种针接触菌落中心部位，移种到营养琼脂斜面或平板上，36℃±1℃,培养18h～24h。取培养物进行革兰氏染色和生化试验。

5.2.6 鉴定

取培养物进行靛基质试验、MR-VP试验和柠檬酸盐利用试验。大肠埃希氏菌与非大肠埃希氏菌的生化鉴别见表1。

表1 大肠埃希氏菌与非大肠埃希氏菌的生化鉴别

5.3 大肠埃希氏菌 MPN 计数的报告

大肠埃希氏菌为革兰氏阴性无芽孢杆菌，发酵乳糖、产酸、产气，IMViC生化试验为++--或-+--。只要有1个菌落鉴定为大肠埃希氏菌，其所代表的LST肉汤管即为大肠埃希氏菌阳性。依据LST肉汤阳性管数查MPN表,报吿每g(mL)样品中大肠埃希氏菌MPN值。

文章来源：《食品安全国家标准汇编检验方法（二）》

版权与免责声明：转载目的在于传递更多信息。

如其他媒体、网站或个人从本网下载使用，必须保留本网注明的"稿件来源"，并自负版权等法律责任。

如涉及作品内容、版权等问题，请在作品发表之日起两周内与本网联系，否则视为放弃相关权利。