[样品制备]

以无菌手续取25mL(或25g)样品，加于含225ml，无菌磷酸盐缓冲液(或生理盐水)的广口瓶(或三角瓶)内(瓶内预置适当数量的玻璃珠)，充分振摇或用均质器以8000) ~10000r/min均质1min成1：10稀释液。

用1mL无菌吸管吸取1：10样品稀释液1.0mL，注入含9.0mL无菌磷酸盐缓冲液(或生理盐水)的试管内，振摇均匀，即成1：10样品稀释液。

另取1.0mL无菌吸管，按上法制备10倍递增样品稀释液。每递增一次，换一支1.0mL无菌吸管。

图1-2大肠菌群的检验程序

根据食品卫生标准要求或对样品污染程度的估计，选择3个适宜的连续稀释度， 每个稀释度接种3管培养基(MPN法) 或2个平皿(平板法) 。

[大肠菌群的MPN计数]

将待检样品和样品稀释液接种MUG al肉汤管， 每管1.0mL(接种量在1.0mL以上者， 接种双料MUGal肉汤管) 。每个样品接

3个连续稀释度， 每个稀释度接种3管培养基。同时另取2支MUGal肉汤管(或双料MUGal肉汤管) 加人与样品稀释液等量的上述无菌磷酸盐缓冲液(或生理盐水)作空白对照。

将接种后的培养管置于(37±1)℃培养箱培养18~24h。

将培养管置于暗处，用波长366nm的紫外光灯照射，如显蓝色荧光，为大肠菌群阳性管；如未显蓝色荧光，则为大肠菌群阴性管。

结果报告：根据大肠菌群阳性管数， 查MPN表(见表1-2) ， 报告每100mL(g)食品中大肠菌群MPN值。

表1-2 大肠菌群最可能数MPN椅索表

［大肠菌群的菌落计数］

用灭菌吸管吸取待检样液1. 0mL,加入无菌平皿内。每个样品接种3个连续 稀释度,每个稀释度接种2个平皿。

于每个加样平皿内倾注15mL 45 ~50℃的Aliz-gal琼脂,迅速轻轻转动平皿， 使之混合均匀。待琼脂凝固后,再倾注3~ 5mL AIiz-gal琼脂覆盖表面。同时将 Aliz-gal琼脂倾入加有1mL上述无菌磷酸盐缓冲液(或生理盐水)的无菌平皿内 作空白对照。

待琼脂凝固后,翻转平板,于(37 + 1)℃培养箱培养18 ~24h。取出平板,计数紫色（或红色）菌落。

［结果报告］

当平板上的紫色（或红色）菌落数不高于150个,且其中至少有一个平板紫色 （或红色）菌落不少于15个时,按下式计算大肠菌群数：

式中 N—样品的大肠菌群数,个∕mL或g；

Σ C—所有计数平板上,紫色（或红色）菌落数之总和；

n₁―计数的最低稀释倍数的平板数；

n₂―共计数的高一稀释倍数的平板数；

d——供计数的样品最低稀释度（如10^-1、10^-2、10^-3等）。

如接种所有（3个）稀释样品的平板上,紫色（或红色）菌落数均少于15个时， 仍按上式计算,但应在所得结果旁加“* ”号,表示为估计值。

如接种未稀释样品和所有稀释样品的平板上,紫色（或红色）菌落数均少于15 个时,报告结果为:每毫升（克）样品少于15个大肠菌群。

如接种未稀释样品和所有稀释样品的平板上,均未发现紫色（或红色）菌落数 时,报告结果为:每毫升（克）样品少于1个大肠菌群。

如平板上的紫色（或红色）菌落数高于150个时,按上式计算,在结果旁加 “ * ”号表示估计值或视情况重新选择较高的稀释倍数进行测定。

相关链接：大肠菌群的快速检测(MPN法及平板法)（一）

文章来源：《食品快速检测实训教程》

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