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小粟科(Berberidaceae)十大功劳原植物为阔叶十大功劳(Mahoniabealei)和细叶十大功劳(Mahoniafortunei),《中国药典》收载的为上述两种植物的干燥茎。但同属多种植物的茎在民间也人药,代黄连用,称木黄连或刺黄连、山黄连等。该属植物世界上有100多种,在我国有近50种,主要分布于长江以南各省。该属植物有清热燥湿、泻火解毒的功效,现代研究证明有抗菌、消炎、抗病毒、降压、抗心率失常、降血糖、抗血小板聚集等作用。该属植物的有效成分主要为生物碱,含量测定有TLC法和HPLC法。CE因其柱效高、样品预处理简单、分析速度快、样品用量少等优点,近年来越来越多地被应用于中草药的分离鉴定。采用CE的CZE模式,用内标法对10种十大功劳属植物中的小檗碱、巴马亭、药根碱的含量进行测定,为其质量控制提供了一种新的快速、简便有效的检测方法。
1.电泳条件
石英毛细管柱内径50μm,总长度为50cm,有效长度41.5cm;背景缓冲液为50mmol/L磷酸氢二钠与50mmol/L磷酸二氢钠的混合体系(磷酸调pH为7.0)-甲醇((2:1)。进样条件:5kPa×10s;分析电压:30kV;检测波长:265nm;温库:20℃;缓冲液使用前均用0.45μm滤膜过滤,并用超声波脱气。每次分析之间,用0.lmol/LNaOH冲洗毛细管2min,超纯水洗3min,缓冲液洗3min,平衡lmin。
2.样品溶液制备
精密称取药材粉末(过80目筛)1g,用甲醇l0mL冷浸1h,超声提取0.5h,1500r/min离心10min,将上清液移入25mL量瓶,加甲醇7mL。重复操作两次,定容。精密吸取此液5mL,加入内标溶液0.55mL,混匀,通过0.45μm滤膜过滤,滤液用超声波脱气后直接进样。
3.样品分析
用选定的方法测定不同种、不同产地及不同采集时间的十大功劳,3种标准品及样品的分离图谱见图7-34。
4.测定结果
对十大功劳属植物中3种生物碱的含量进行测定,各组分均达基线分离。盐酸小檗碱在4.9-498.6μg/mL,盐酸巴马亭在5.1-504.9μg/mL,盐酸药根碱在5.1-505.8μg/mL分别有良好的线性关系。各类化合物的回收率在96.00%-102.97%。结果显示:不同种植物、同种植物不同产地及不同采集时间生物碱含量都有较大差别,但生物碱含量普遍较高,小檗碱为1.67%-0.11%、巴马亭为0.32%-0.02%、药根碱为0.56%-0.09%。可见高效毛细管电泳法是中草药质量控制的一种简便、快速、有效的方法。
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