2.液相色谱选择流动相的一般方法

如果以影响分离度的因素来考虑作为流动相溶剂的选择原则，则如图9-36所示。此三角形图表明了在液相色谱分离中选择流动相的一般方法。

图9-36  液相色谱法中选择流动相的一般方法

如将整个三角形代表所有的溶剂，首先应排除一些物理性质(沸点、赫度、紫外吸收等)不适于在液相色谱中使用的溶剂，如图9-36三角形底部划横线部分的面积，相当于一半以上的溶剂被排除在外。在剩下物理性质适用的溶剂中，还需选择洗脱强度适当的溶剂，即选择能使被分析样品中组分的容量因子k'值保持在最佳的1～10之间，对含多组分的样品，k'值可扩展在0.5～20之间。这样又排除了图9-36中划交叉线部分的面积。在能提供洗脱强度适当、使样品组分k'值保持最佳的溶剂当中，还要进一步选择能将样品中不同组分分离开，且能使每两个相邻组分的分离因子a_1/2大于1.05，以获得具有满意分离度的分析结果。这样只有位于三角形顶端的空白面积对应的溶剂，才能满足液相色谱法的要求。

当选择了能够提供适用k'和a值的溶剂，作为液相色谱的流动相后，还必须与能提供高理论塔板数的色谱柱相组合，才能使样品中不同组分的分离达到所期望的分离度。

由上述可知，表征溶剂物理和化学特性的重要参数，对液相色谱法中流动相的选择会起到十分重要的作用。因此了解相关的特性参数和掌握选择溶剂的一般原则，对进行高效液相色谱的实践特别重要。

高效液相色谱法中常用溶剂的性质，如表9-12所示。

表9-12  高效液相色谱法常用溶剂的性质

①符号bp-沸点/℃；M-相对分子质量；d-相对密度(20℃)；e-介电常数(20℃)；η-动力黏度(25℃)/mPa·s；RI-折射率；λ_uv-UV吸收截止波长；ε^o-在Al₂O₃吸附剂上的溶剂强度参数；δ_d-溶解度参数(由沸点计算获得)；δ_d-色散溶解度参数；δ_o-取向溶解度参数；δ_a-接受质子溶解度参数；δ_h-给予质子溶解度参数；p'-溶剂极性参数；x_e-质子接受体作用力；x_d-质子给予体作用力；x_n-强偶极作用力；u-电偶极矩/C·m；γ-表面张力/(10～3N/m)；P'+0.25e-离子对色谱溶剂强度。

②不同化合物的平均值。

③系指20℃时溶解在溶剂中的水的质量分数。

相关链接：液固色谱法和液液色谱法（二）