展青霉素纯品为无色结晶，分子式C7H6O4，相对分子质量154，熔点110℃，在70～100℃可真空升华，能溶于水和乙醇，在碱性条件下不稳定，在酸性条件下稳定，耐热。展青霉素能改变细胞膜的通透性，利于K+外流；展青霉素可与琉基基团结合，抑制含巯基基团的酶活性；展青霉素对免疫系统也有影响。

青霉、扩张青霉、棒状青霉、尊麻青霉等是展青霉素的产生真菌，当水果受上述真菌污染时，水果及水果制品中均会检出该毒素。我国在20世纪90年代曾调查过水果半制品，检出率达到76.9%鉴于展青霉素毒性及其污染状态，有不少国家制定了水果制品最高限量标准，一般为50ug/kg。我国规定水果半成品为100ug/kg，果汁、果酒、水果罐头为50 ug/kg。

展青霉素的检测方法有薄层色谱法、气相色谱法、高效液相色谱法及展青霉素试剂盒等。本书介绍展青霉素的高效液相色谱法。

(一)检测原理

试样中的展青霉素用乙腈提取后，提取液经净化柱净化后，在高效液相色谱柱上分离后，以紫外检测器于276nm处检测，外标法定量。

(二)试剂及仪器

甲醇、乙腈(均为色谱纯)；Millipore超纯水；果胶酶(Pectinase, EC 232-885-6)，活性不低于1500U/g。

展青霉素标准液：准确移取1.00mL展青霉素标准物质乙腈溶液(100ug/mL)，用乙腈稀释定容至10mL,混匀。该标准液质量浓度10.00ug/mL。

羟甲基糠醛标准液：准确称取羟甲基糠醛标准物质(质量分数≥99.0%)0.02g，溶解于10mL甲醇，用水稀释定容至100 mL，再用水稀释10倍，混匀。该标准液质量浓度20.0ug/mL。

展青霉素-羟甲基糠醛混合标准工作液：分别取展青霉素标准液和羟甲基糠醛标准液各1.00mL于容量瓶中，氮气吹至近干，用流动相稀释定容至10mL,混合标准液展青霉素质量浓度1.00ug/ mL,羟甲基糠醛质量浓度2.00ug/mL。

高效液相色谱仪，配有四元泵、在线脱气机、柱温箱、紫外检测器和色谱工作站；涡流混合器；净化柱：Mycrosep 228AflaPat柱或相当者。

(三)检测步骤

1．液体试样制备

移取4mL待测样于具塞量筒中，加入21 mL乙腈，涡旋振荡器振荡2min后，静置分层，收集上层清液。

2．半固体、固体试样制备

半固体样品匀浆、固体试样粉碎后，称取4g于具塞量筒中，加入4mL水、75 uL果胶酶，室温下放置过夜(或40℃下放置2h)。加入21 mL乙腈，涡旋振荡器振荡1 min后，静置分层，收集上层清液。

3．净化

移取约8mL提取液，过Mycrosep 228AflaPat净化柱，收集净化液，准确移取4mL于试管中，40℃下用氮气吹至近干(留约2uL样液)。加入0.4 mL流动相，混匀，0.45 um滤膜过滤后，上机测定。

4.测定

测定条件：色谱柱Kromasil C₁₈(长250mm，内径4.6mm，粒径5um)，流动相四氢呋喃溶液(体积比0.8：100)，色谱柱柱温30℃，流速1.0mL/min，检测波长276nm。先测定展青霉素-羟甲基糠醛混合标准工作液，以浓度与测量峰面积或峰高，绘制标准曲线。然后在上述同样条件下，取10 uL样品处理液进样分析，测量保留时间、峰面积或峰高，与标准比较进行定性定量分析。

(四)注意事项

(1) Mycrosep 228AflaPat是一种净化柱商品名，柱内填硅藻上、硅胶、无水硫酸钠等。可用相当者代替。

(2)甲基糠醛是果汁中己酮糖在酸性或高温环境下脱水形成的产物，是苹果汁中的常见物质。由于甲基糠醛与展青霉素均带有羟基，结构相似，在苹果汁中展青霉素的提取、净化过程中两者很难分离，羟甲基糠醛成为检测展青霉素时最常见、最易混淆的干扰物。因此，检测过程中有效地分离羟甲基糠醛是检测果汁中展青霉素的必要条件。试验中直接选用展青霉素-羟甲基糠醛混合标准工作液进样来衡量色谱分离效果。在上述条件下，羟甲基糠醛与展青霉素的保留时间分别约为7.8 min和10.1 min。

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文章来源：《食品质量与安全检测技术》

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