1 范围

本标准规定了泰国茉莉香米品种鉴定和纯度检验的DNA检验法、感官检验法和水煮检验法。

本标准适用于泰国茉莉香米中香米法定品种KDML105和RD15的鉴别和纯度检验。

2 规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法

SN/T 0798进出口粮油、饲料检验名词术语

SN/T 0800.1进出口粮油、饲料检验抽样和制样方法

SN/T 1193基因检验实验室技术要求

3 术语和定义

SN/T 0798界定的以及下列术语和定义适用于本文件。

3.1

泰国茉莉香米Thai Jasmine rice; Thai Hom Mali rice; Thai Frangrant rice

经泰国农业局、农业部和合作社注册的非糯性芳香水稻品种Kao Dok Mali 105或RD15的稻谷经碾磨获得的糙米或精米。

3.2

品种纯度vatietal purity

本品种的质量占试样的百分率。

3.3

聚合酶链式反应polymerase chain reaction; PCR

用于扩增位于两段已知序列之间DNA (deoxyribonucleosidea acid，脱氧核糖核酸)的方法。模板DNA经过高温变性成单链，在DNA聚合酶和适宜的温度下，两条互不互补的寡核苷酸片段即引物分别与模板DNA两条链上的一段互补序列发生退火，接着在DNA聚合酶的催化下以4种dNTP为底物，使退火引物得以延伸，如此反复变性、退火和DNA合成这一循环，使位于两段已知序列之间的DNA片段呈几何倍数扩增，经25个～30个扩增循环，扩增倍数达到约106。

3.4

随机扩增多态性分析random amplification polymorphic DNA; RAPD

利用一系列随机排列的寡核苷酸(通常为十聚体)为引物，对所研究的基因组DNA进行PCR扩增。扩增产物通过聚丙烯酰胺或琼脂糖凝胶电泳分离后，经EB染色或放射自显影来检测扩增产物DNA片段的多态性，这些扩增DNA片段的多态性反映了基因组相应区域的DNA多态性。

4 DNA检验法

4.1 原理

通过RAPD中RI2-449目标条带和普通PCR中RI5S目标条带是否阴性来鉴定样品是否为泰国茉莉客采法定品种；通过对样品中随机扫。选的44个米粒分别检验来计算样品中泰国茉莉香米的品种纯度。

4.2 抽样与制样

按照SN/T 0800.1的规定执行。

4.3 试剂和材料

除另有规定外，试剂为分析纯或生化试剂。实验用水符合GB/T 6682的要求。

4.3.1 检测引物序列

RI2：5'TGCTGCAGGT3'

RI5-F：5'ATACGCTCGCATATATCTAC3'

RI5-R：5'GAACGGACTCCAAGATGCAA3'

4.3.2 TagDNA聚合酶(Taq , Thermus aquatzcu，水生栖热菌)。

4.3.3 dNTPs (deoxyribonucleoside tripn osphate,脱氧核苷酸三磷酸)：dATP(deoxyadenosine triphosphate，脱氧腺苷三磷酸)，dTTP(deoxythymidine triphosphate，脱氧胸苷三磷酸)、dCTP(deoxy-cytidine triphosphate，脱氧胞苷三磷酸),dGTP(deoxyguanosine triphosphate，脱氧鸟苷三磷酸)。

4.3.4 琼脂糖：电泳纯。

4.3.5 溴化乙锭。

4.3.6 三氯甲烷。

4.3.7 无水乙醇。

4.3.8 70％乙醇。

4.3.9 DNA分子量标准品(100 bp～2000bp)。

4.3.10 裂解液：1％ CTAB(cetyltrithylammonium bromide，十六烷基三甲基溴化溴)，0.05 mol/L Tris-HCl(pH8.0)[Tris-: tris(hydroxymethyl) aminomethane，三(羟甲基)氨基甲烷]，0.7 mol/L NaCl, 0.01 mol/L EDTA(pH8.0,ethylene diaminetetraacetic acid，乙二胺四乙酸)。

4.3.11 TE缓冲液(Tris-Cl、EDTA缓冲液):10 mmol/L Tris-HCl(pH8.0)，1 mmol/L EDTA (pH8.0)。

4.3.12 10×PCR缓冲液：100 mmol/L KCl，160 mmol/L (NH₄)₂ SO₄，20 mmol/L MgSO₄，200 mmol/L Tris-HCl(pH8.8), 1％ Triton X-100(t-octylphenoxypolyethoxyethanol，辛基苯氧基聚乙氧乙醇)，1mg/mL BSA(Bovine Serum Albumin，牛血清蛋白)。

4.3.13 电泳缓冲液；Tris 54 g，硼酸27.5g，0.5 mol/L EDTA·Tris-HCI (pH8.0) 20mL，加蒸馏水至1000 mL；使用时10倍稀释。

4.3.14 溴化乙锭贮存液：用水配制成10 mg/mL。

4.3.15 加样缓冲液：0.25％溴酚蓝，40%(质量浓度)蔗糖水溶液。

4.3.16 酶切缓冲液：10 mmol/L Tris-HCl(pH7.5),10 mmol/L MgCl₂，50 mmol/L NaCl, 0.1mg/mL BSA。

4.4 仪器设备

4.4.1DNA热循环仪。

4.4.2 核酸蛋白分析仪或紫外分光光度计。

4.4.3 恒温水浴锅。

4.4.4 离心机：离心力12000g。

4.4.5 微量移液器(0.5uL～10uL,10uL～100uL,10uL～200uL,100uL～1000uL)。

4.4.6 电泳仪。

4.4.7 紫外检测仪。

4.4.8 pH计。

4.4.9 天平：感量0.01g。

文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

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