1 范围

本标准规定了调味品中转基因植物成分实时荧光PCR定性检测方法。

本标准适用于以玉米、大豆、油菜籽、马铃薯、大米、番茄等农产品及其加工产品为原料生产的调味品中转基因植物成分的实时荧光PCR定性检测。本标准适用的调味品按照GB丁20903，分为酱类、豆豉、腐乳、蚝油、香辛料和香辛料调味品、复合调味料、火锅调料，具体包括豆酱、面酱、番茄酱、辣椒酱、芝麻酱、花生酱、芥未酱．豆豉．腐乳，蚝油，香辛料、香辛料调味粉，鸡精调味料、鸡粉调味料、牛肉粉调味料、海鲜调味料，风味酱、沙拉酱、蛋黄酱，火锅底料、火锅蘸料等。其他调味品参照使用。

2 规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法

GB/T 19495.2 转基因产品检测实验室技术要求

GB/T19195.3 转基因产品检测核酸提取纯化方法

GB/T 19495.7 转基因产品检测抽样和制样方法

GB/T 20903 调味品分类

GB/T 27025 检测和校准实验室能力的通用要求

SN/T 1204 植物及其加工产品中转基因成分实时荧光PCR定性检验方法

3 术语、定义和缩略语

3.1 术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1.1

调味品condiment

在饮食、烹饪和食品加工中广泛应用的，用于调和滋味和气味并具有去腥、除擅、解腻、增香、增鲜等作用的产品。

3.1.2

DNA的提取和纯化DNA extraction and purification

从测试样品的各种成分中释放DNA，随后纯化DNA去除PCR反应抑制剂。

3.1.3

外源基因exogenous gene

利用生物工程技术转入的其他生物基因，使该生物品种表现新的生物学性状。

3.2 缩略语

下列缩略语适用于本文件。

EPSPS(5-enolpyruvylshkimate-3-phosphate synthase gene) :5-莽草酸-3-磷酸合酶基因

FAM(6-carboxyfluorescein) :6-羧基荧光素

GOS(A root-specific rice gene highly expressed in roots from seedlings and mature plants which encodes a 14 kDa protein)：编码一个14 kDa蛋白质、在幼苗和成熟植株根部高度表达的水稻种属特异性基因 LA (linear acrylamide)：线状丙烯酰胺

NOS(terminator of nopaline synthase gene)：胭脂碱合酶基因终止子

TAMRA(carboxy-tetramethyl-rhodamine)羧基四甲基罗丹明

tRNALeu：叶绿体亮氨酸转运核糖核酸基因

4 方法提要

调味品多属于深加工食品，一方面DNA在食品加工过程中受到破坏，另一方面调味品可能富含盐、糖、蛋白质、发酵产生的有色物质等，这些因素均会影响DNA提取纯化和PCR检测效果。本标准应用CTAB-LA协同沉淀和低温差速离心等实验技术，对调味品中的植物基因组DNA进行分离、纯化和浓缩，使之适用于TagMan实时荧光PCR检测技术，通过检测其中是否含有各种外源基因，达到对调味品中转基因植物成分定性PCR检测的目的。

5 材料与试剂

5.1 设备和材料

5.1.1 高速冷冻离心机：最高转速18000r/min。

5.1.2 台式离心机：最高转速18000r/min。

5.1.3 微型个人离心机。

5.1.4 双温水浴:37℃±1℃，65℃±1℃。

5.1.5 制冰机。

5.1.6 冰箱：2℃～8℃、-20℃、-80℃。

5.1.7 核酸真空于燥系统。

5.1.8 核酸蛋白分析仪。

5.1.9 实时荧光PCR仪。

5.1.10 离心管：1.5 mL，2 mL，15 mL，50 mL。

相关链接：泰国茉莉香米品种鉴定及纯度检验方法（三）

文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

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