1 范围

本标准规定了动物源性食品中β-内酰胺类、四环素类、大环内酯类和氨基糖苷类药物残留检测的试样制备、保存和微生物抑制检测方法。

本标准适用于肉类、蛋、鱼和虾中的抗生素残留筛选检测，阳性结果须用其他方法进行确证。

2 规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法

3 试样制备和保存

3.1 试样制备

肉、鱼和虾：从原始样品中取出部分有代表性样品，将可食部分放入高速组织捣碎机均质，充分混匀，用四分法缩分不少于500 g试样。装入清洁容器内，并标明标记。

蛋：从原始样品中，随机分出一半(不少于500g)，鲜蛋需去壳。将蛋黄和蛋白于混合器中充分混匀，装入清洁容器内，作为试样，并标明标记。

制样操作过程中必须防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。

3.2 试样保存

肉、鱼、虾和蛋：试样于-18℃以下保存。

4 测定方法

4.1 方法提要

试样经缓冲液提取、温育和离心后，取上清液进行测定。利用抗生素对敏感菌的抑制作用来判别试样中是否含有抗生素。

4.2 设备和材料

4.2.1 恒温箱：30℃±1℃，水平隔层。

4.2.2 离心机。

4.2.3 高速组织捣碎机。

4.2.4 恒温水浴锅。

4.2.5 涡旋振荡器。

4.2.6 显微镜：10×～100×。

4.2.7 游标卡尺：测量范围0mm～200 mm，精度0.02mm或抑制圈测量仪。

4.2.8 灭菌平皿：直径90 mm，底部平整的玻璃或一次性塑料灭菌平皿。

4.2.9 圆形滤纸片：直径10 mm，厚1.1 mm。日本Toyo Roshi Kaisha, Ltd.产品，或相当者。

4.2.10 克氏瓶。

4.2.11 可调移液器：10 uL～100 uL、100 uL～1000 uL。

4.3 菌种和培养基

4.3.1 菌种

4.3.1.1 藤黄微球菌Micrococcus luteus ATCC9341。

4.3.1.2 枯草芽胞杆菌Bacillus subtilis ATCC6633。

4.3.1.3 蜡样芽胞杆菌覃状变种Bacillus cereus var. mycoides ATCC11778。

4.3.2 培养基

4.3.2.1 保存及传代用细菌培养基。

4.3.2.2 增菌用液体培养基。

4.3.2.3 增菌用固体培养基。

4.3.2.4 检定用培养基：抗生素培养基5号（AM5），抗生素培养基8号（AM8 )。

4.4试剂

本方法所用化学试剂为分析纯，试验用水为蒸馏水或去离子水，试验用水应符合GB/T 6682的规定。

4.4.1 缓冲液

4.4.1.1 柠檬酸-丙酮缓冲液

a)0.2 mol/L柠檬酸溶液：称取柠檬酸（C6H8O7)4.2g，用无菌蒸馏水溶解并定容至100 mL。

b)0.5 mol/L 氢氧化钾溶液：称取氢氧化钾（KOH)2.8g，用无菌蒸馏水溶解并定容至100 mL。

c）混合液：0.2mol/L柠檬酸溶液和0.5mol/L氢氧化钾溶液等量混合。

d)柠檬酸-酮缓冲液：按混合液十丙酮＋蒸馏水=35+35+30比例制备。

4.4.1.2 pH4.5磷酸盐缓冲液：称取13.6g磷酸二氢钾（KH2PO4）用蒸馏水溶解并定容至1 000 mL,121℃高压灭菌15 min。

4.4.1.3 pH6.0磷酸盐缓冲液：称取8.0 g磷酸二氢钾（KH2PO4）及2.0g磷酸氢二钾（K2HPO4)，用蒸馏水溶解并定容至1 000 mL,121℃高压灭菌15 min。

4.4.1.4 pH8.0磷酸盐缓冲液：称取0.523g磷酸二氢钾（KH2PO4）及16.73g磷酸氢二钾(K2HPO4)，用蒸馏水溶解并定容至1 000 mL,121℃高压灭菌15 min。

4.4.2 抗生素标准溶液

4.4.2.1 氨苄西林标准储备液：称取一定量的氨苄西林标准品，用灭菌去离子水溶解并定容至1000 ug/mL，置2℃～8℃冰箱保存，贮存期2 d。

4.4.2.2 氨苄西林标准工作液：吸取一定量的氨苄西林标准储备液，用pH6.0磷酸盐缓冲液(4.4.1.3）稀释成0.025 ug/mL的标准工作液，须当日配制使用。

4.4.2.3 卡那霉素标准储备液：称取一定量的卡那霉素标准品，用灭菌去离子水溶解并定容至1000 ug/mL，置2℃～80C冰箱保存，贮存期1个月。

4.4.2. 4 卡那霉素标准工作液：吸取一定量的卡那霉素标准储备液，用pH8.0磷酸盐缓冲液(4.4.1.4）稀释成0.5ug/mL的标准工作液，须当日配制使用。

4.4.2.5 土霉素标准储备液：称取一定量的土霉素标准品，用0.1 mol/L盐酸溶解并定容至1000ug/mL，置2℃～8℃冰箱保存，贮存期7d。

4.4.2.6 土霉素标准工作液：吸取一定量的土霉素标准储备液，用pH4.5磷酸盐缓冲液（4.4.1.2)稀释成0.1 ug/mL的标准工作液，须当日配制使用。

4.4.2.7 红霉素标准储备液：称取一定量的红霉素标准品，用少量30％甲醇溶解，再用pH8.0(4.4.1.4)磷酸盐缓冲丽定容至1000 ug/mL，置2℃～8℃冰箱保存，贮存期7d。

4.4.2.8 红霉素标准工作液：吸取一定量的红霉素标准储备液，用pH8.0磷酸盐缓冲液（4.4.1.4)稀释成0.05 ug/mL的标准工作液，须当日配制使用。

文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

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