12 分析步骤

12.1 试样处理

12.1.1 粮食

试样用水洗三次，至60℃烤箱中烘去表面水分，用粉碎机粉碎，储于塑料瓶内，放一小包樟脑精,盖紧瓶塞保存，备用。

12.1.2 蔬菜及其他植物性食物

取可食部，用蒸镏水冲洗三次后，用纱布吸去水滴，不锈钢刀切碎，取一定量试样在烘箱中于60℃烤干，称重，计算水分。粉碎，备用。

计算时应折合成鲜样重。

12.1.3 其他固体试样

粉碎、混匀试样，备用。

12.1.4 液体试样

混匀试样，备用。

12.2 试样的消化

称含硒量为0.01ug～0.5ug的粮食或蔬菜及动物性试样0.5g～2g(精确至0.001g),液体试样吸取1.00mL～10.00mL于磨口锥形瓶内，加10mL 5%去硒硫酸，待试样湿润后，再加20mL混合酸液放置过夜，次日置电热板上逐渐加热。当剧烈反应发生后，溶液呈无色，继续加热至白烟产生，此时溶液逐渐变成淡黄色，即达终点。某些蔬菜试样消化后出现浑浊，以致难以确定终点，这时可注意瓶内出现滚滚白烟，此刻立即取下，溶液冷却后又变为无色。有些含硒较高的蔬菜含有较多的Se⁶⁺,需要在消化完成后再加10mL 10%盐酸，继续加热，使再回终点，以完全还原Se⁶⁺为Se⁴⁺,否则结果将偏低。

12.3 测定

上述消化后的试样溶液加入20.0mL EDTA混合液，用氨水(10.6)及盐酸(10.9)调至淡红橙色(pH1.5～2.0)。以下步骤在暗室操作：加DAN试剂(10.2)3.0mL,混匀后，置沸水浴中加热5min,取出冷却后，加环己烷3.0mL,振摇4min,将全部溶液移入分液漏斗，待分层后弃去水层，小心将环己烷层由分液漏斗上口倾入带盖试管中，勿使环己烷中混入水滴，于荧光分光光度计上用激发光波长376nm、发射光波长520nm测定4,5-苯并苤硒脑的荧光强度。

12.4 硒标准曲线绘制

准确量取标准硒溶液(0.05ug/mL)0.00mL,0.20mL,1.00mL,2.00mL及4.00mL,相当于0.00ug,0.01ug,0.05ug,0.10ug及0.20ug硒，加水至5.0mL后，按试样测定步骤同时进行测定。

当硒含量在0.5ug以下时荧光强度与硒含量呈线性关系，在常规测定试样时，每次只需做试剂空白与试样硒含量相近的标准管(双份)即可。

12.5 分析结果的表述

试样中硒含量按式(2)计算：

式中：

X—试样中硒含量，单位为微克每克或微克每毫升(ug/g或ug/mL)；

m₁—试管中硒的质量，单位为微克(ug)；

F₁—标准硒荧光读数；

F₂—试样荧光读数；

F₀—空白管荧光读数；

m—试样质量，单位为克或毫升(g或mL)。

以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留三位有效数字。

13 精密度

在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10 %。

相关链接：食品中硒的测定—荧光法（一）

文章来源：《食品安全国家标准汇编检验方法（一）》

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