5 试样制备与净化

5.1 样品采集与保存

5.1.1 现场釆集的样品用避光材料如铝箔、棕色玻璃瓶等包装，置冷冻箱中运输到实验室，-10℃以下低温保存。

5.1.2 液体或固体样品，如鱼、肉、蛋、奶等经过匀浆使其匀质化后可使用冷冻干燥或无水硫酸钠干 燥，混匀。油脂类样品可直接用正己烷溶解后进行净化分离。

5.2 试样制备

5.2.1 溶剂和提取液的旋转蒸发浓缩

5.2.1.1 连接旋转蒸发器，将水浴锅预热至45℃。在试验开始前，预先将100 mL正己烷:二氯甲烷 (1:1,体积比)作为提取溶剂浓缩，以清洗整个旋转蒸发仪系统。如有必要，对经浓缩后的溶剂以及收集瓶中的溶剂进行检验，以便对污染状况进行检查。在两个浓缩样品之间，分三次用2mL～3mL溶 剂洗涤旋转蒸发仪接口，用烧杯收集废液。

5.2.1.2 将装有样品提取液的茄形瓶连接到旋转蒸发器上，缓慢抽真空。

5.2.1.3 将茄形瓶降至水浴锅中，调节转速和水浴的温度(或真空度)，使浓缩在15min～20min内 完成。在正确的浓缩速度下，流入废液收集瓶中的溶剂流量应保持稳定，溶剂不能有爆沸或可见的沸腾 现象发生。

注：如果浓缩过快，可能会使样品损失。

5.2.1.4 当茄形瓶中溶剂约为2 mL时，将茄形瓶从水浴锅中移开，停止旋转。缓慢并小心地向旋转 蒸发仪中放气，确保打开阀门时不要太快，以免样品冲出茄形瓶。用2mL溶剂洗涤接口，用烧杯收集 废液。

5.2.2 索氏提取

5.2.2.1 提取前，在索氏提取器中装入一支空的纤维素或玻璃纤维提取套筒，以正己烷:二氯甲烷(1:1,体积比)为提取溶剂，预提取8h后取出晾干。

5.2.2.2 将下列处理好的样品装入提取套筒中,高度以不超过溢流管为限。在提取套筒中加入适量¹³C₁₂标记的定量内标的储备溶液(3.2.1.3),用玻璃棉盖住样品，平衡30min后装入索氏提取器，以适量正己烷:二氯甲烷(1:1，体积比)为溶剂提取18h～24h,回流速度控制在3次/h～4次/h。

鱼、肉、蛋、奶等样品：称取50g～200g样品(精确到0.001g),经过冷冻干燥后，准确称重，计算含水量。根据估计的污染水平，称取适量试样(精确到0.001g),加无水硫酸钠研磨，制成能自由流动的粉末。将粉末全部转移至处理好的提取套筒，置于索氏抽提器中进行提取。

奶酪等固体乳制品样品：将奶酪直接研成细末后称量，其他固体乳制品直接称量。称取适量试样(通常为10g,精确到0.001g),置研钵中，加无水硫酸钠，研磨成干燥的、可以自由流动的粉末。无水硫酸钠与海砂混合物使用量取决于试样的取样量及含水量。将粉末全部移至处理好的提取套筒。用沾有正己烷的棉签将研钵、表面皿和研磨棒擦净。该棉签一同放入套筒中进行提取。

注：当己知样品含量或估计其含量较高时，应适当减少用于分析的试样量。所有试样、空白试验、初始精密度及回收率试验(IPR)、过程精密度及回收率试验(OPR)应具有相同的分析过程，以便检查污染来源及损失情况。

5.2.2.3 提取后，将提取液转移到茄形瓶中，旋转蒸发浓缩至近干。

5.2.2.4 茄形瓶中的残留物用少量正已烷溶解以进行下面的净化。如需要考察净化过程的回收率则加入净化标准溶液(3.2.1.2),但日常的分析中该步骤可省略。

5.2.2.5 若结果报告需报告脂肪含量，则需要测定样品的脂肪含量。测定脂肪含量后，可以加少量正己烷溶解，以备进行净化处理。

5.2.2.6 脂肪含量的测定：浓缩前准确称重茄形瓶，将溶剂浓缩至干后准确称重茄形瓶，两次称重结果的差值为试样的脂肪量。

按式(1)计算脂肪含量：

式中;

X₁—脂肪含量，%;

m₁—试样的脂肪量，单位为克(g);

m₂—试样的质量，单位为克(g)。

5.2.3 液液萃取

5.2.3.1 依情况准确量取液体奶样样品200mL～300mL,转移至大小合适的分液漏斗中，加入适量¹³C₁₂标记的定量内标的储备溶液(3.2.1.3)。

5.2.3.2 按20mg/g样品的比例称取草酸钠，加少量水溶解后，将该溶液加入样品，充分振摇。

5.2.3.3 加入与样品等体积的乙醇，再进行振摇。

5.2.3.4 在样品-乙醇溶液中加入与5.2.3.3等体积的乙醚:正己烷(2:3,体积比)，振摇1min。静置分层后，转移出有机相。然后在水相中加入与样品原始体积相同的正己烷，振摇1 min。静置分层后，转移出有机相。合并有机相，浓缩至小于75mL。

5.2.3.5 转移提取液至250mL分液漏斗中，加入30mL蒸镏水振摇，弃去水相。

5.2.3.6 转移上层有机相至250mL烧瓶中，加入适量无水硫酸钠，振摇。静置30min后，用一张经过甲苯淋洗过的滤纸过滤，滤液置于茄形瓶中。

5.2.3.7 将提取液转移到茄形瓶中，旋转蒸发浓缩至近干。如需测定脂肪含量，则按5.2.2.6步骤进行脂肪含量的测定。

5.2.3.8 茄形瓶中的残留物用少量正己烷溶解以进行下面的净化。如需要考察净化过程的回收率则加入净化标准溶液(3.2.1.2),但日常的分析中该步骤可省略。

5.2.4 加速溶剂萃取

5.2.4.1 提取前应将所用萃取池以正己烷:二氯甲烷(1:1,体积比)进行清洗。

5.2.4.2 将下列处理好的样品装入萃取池中。萃取池中应预先放入醋酸纤维素过滤膜。在萃取池中加入适量¹³C₁₂标记的定量内标的储备溶液(321.3),密闭后，放于萃取仪上，以正己烷:二氯甲烷(1:1,体积比)为溶剂提取。参考条件为：温度，150℃；压力，10.3MPa(1500psi)；循环，1次；静态时间，10min。

鱼、肉、蛋等含水量较高样品：称取50g～200g样品(精确到0.001g),经过冷冻干燥后，准确称重，计算含水量。根据估计的污染水平，称取适量试样(精确到0.001g),置研钵中，研磨成粉状，加入硅藻土，混匀后，全部转移至处理好的萃取池。

液体乳样品：准确称取80g～100g样品(精确到0.001g),经过冷冻干燥后，置研钵中，研磨成粉状，加入硅藻土，混匀后，全部转移至处理好的萃取池。

干燥样品：研磨成粉后，根据估计的污染水平，称取适量试样(精确到0.001g),置研钵中，加入硅藻土，混匀后，全部转移至处理好的萃取池。

每个样品所对应硅藻土用量取决于所应用的萃取池的体积和所称取的该样品研磨后的体积。

5.2.4.3 提取后，进一步处理按5.2.2.3～5.2.26步骤进行。

5.2.5 其他

取适量黄油等油脂试样置烧杯中，加热至50℃～60℃,使油脂明显地分离出来。融化的油脂经干燥的滤纸或者一小段玻璃棉过滤到另一容器中，从中准确称取油脂样品适量(精确到0.001g),用正己烷溶解后，加入适量¹³C₁₂标记的定量内标。

文章来源：《食品安全国家标准汇编检验方法（一）》

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