5.3.4 凝胶渗透柱净化

注：用于去除样品提取液中类脂的备选净化方法，必要时选择。

5.3.4.1 在层析柱底部填上玻璃棉，装入50gBio-Beads S-X3凝胶，用甲苯冲洗后，保存在环己烷:乙酸乙酯(1:1,体积比)中。

注：凝胶柱放置时，溶剂不得流空。

5.3.4.2 在样品提取液(通常浓缩至3mL～5mL)中加少量正己烷，注入层析柱，使样品提取液完全渗入柱内。

5.3.4.3 用10mL环己烷:乙酸乙酯(1:1,体积比)分两次洗涤原茄形瓶，转入柱内。

5.3.4.4 用100mL环己烷:乙酸乙酯(1:1,体积比)淋洗，弃去淋洗液，柱下放一茄形瓶。

5.3.4.5 用90mL环己烷:乙酸乙酯(1:1,体积比)洗脱，得到的洗脱液中含PCDD/Fs和DL-PCBs。

5.3.5 活性炭柱净化

注：PCDD/Fs和非邻位氯取代的DL-PCBs备选的净化方法，必要时选择。

5.3.5.1 活性炭柱制备：取5mL一次性玻璃移液管，切除上端约3.8cm处并挫磨锐缘处，取适量玻璃棉置入并以两只1mL玻璃移液管于刻度“0”处塞紧，依次填入0.5mL活性硅胶、0.7mL Carbon/Celite545、0.5mL活性硅胶，取适量玻璃棉置入并塞紧。使用前用下列溶剂依次淋洗：4mL甲苯、2mL二氯甲烷:甲醇:甲苯(75:20:5,体积比)和4mL环己烷:二氯甲烷(1:1,体积比)。

5.3.5.2 净化：先以2.5mL甲醇及2.5mL二氯甲烷：正己烷(1:1,体积比)溶液依次将活性炭柱(切口端向上)淋洗两次，弃去淋洗液，倒置柱管(切口端向下)，将浓缩到约ImL的提取液(己进行除脂处理)小心移入活性炭柱，然后用1mL二氯甲烷：正己烷(1:1，体积比)溶液洗涤原瓶两次，并移入活性炭柱内，待液面流至玻璃棉时，用吸球吹出柱内溶剂。再次倒置管柱(切口端向上)，用25mL甲苯洗脱柱子，用50mL茄形瓶收集洗脱液。

5.3.5.3 收集的洗脱液加入3mL的辛烷或壬烷。将收集的洗脱液分别用旋转蒸发仪浓缩至3mL～5mL。

5.3.6 弗罗里土柱净化

注：PCDD/Ts备选的净化方法，必要时选择。

5.3.6.1 层析柱填充：取直径为15mm的玻璃柱，底部填上玻璃棉后，依次装入2g无水硫酸钠、15 g弗罗里土、2g无水硫酸钠。以正己烷湿法装柱，轻敲层析柱，使吸附剂分布均匀。

5.3.6.2 用200mL正己烷淋洗已被活化的弗罗里土柱，当液面至距无水硫酸钠层约2mm时，关闭柱阀，弃去淋洗液。

5.3.6.3 加入浓缩后的提取液(已进行除脂处理)，打开柱阀。

5.3.6.4 用正已烷洗涤原茄形瓶2次，合并至弗罗里土柱中。

5.3.6.5 用200mL正己烷淋洗干扰组分，弃去淋洗液，柱下放一茄形瓶。

5.3.6.6 用300mL二氯甲烷洗脱，收集洗脱液。

5.3.6.7 将3mL辛烷或壬烷加入收集的洗脱液中，将收集的洗脱液用旋转蒸发仪浓缩至3mL～5mL。

5.3.7 全自动样品净化系统自动净化分离

注：全自动样品净化系统的自动净化分离原理与传统的柱色谱方法相同，该系统使用三根一次性商业化净化柱，依次为多层硅胶柱、碱性氧化铝柱和活性炭柱。整个净化过程通过计算机按设定程序控制往复泵和阀门进行。

5.3.7.1 由于全自动样品净化系统提供的净化柱存在容量问题，在处理高脂肪含量时需要预先使用酸化硅胶去除样品中的大部分脂肪。这可以通过在全自动样品净化系统中增加一个大容量酸化硅胶柱解决；也可以合并采用任选步

5.3.1、5.3.2或5.3.4或组合方法手动去除样品中的大部分脂肪，予以解决。

注：当样品回收率出现异常时，应对全自动样品净化系统流速进行校正。

5.3.7.2 按仪器使用说明要求，连接净化层析柱。

5.3.7.3 将各净化柱按顺序连接在全自动样品净化系统上，按程序配好各洗脱溶液并连接好管路，设定计算机洗脱程序。

5.3.7.4 将经酸化硅胶或者凝胶渗透色谱处理的浓缩提取液转移到全自动样品净化系统的进样管。

5.3.7.5 按照洗脱流程图顺序洗脱,对样品进行净化、分离，分别收集PCDDs/Fs和DL-PCBs组分。

5.3.7.6 将收集的各洗脱液分别用旋转蒸发仪浓缩至3mL～5mL。

5.3.8 其他

为了将PCDD/Fs和DL-PCBs从基质材料中充分地分离出来，可根据基质材料或干扰组分的具体情况选用不同的吸附剂进行净化。制备酸化硅胶以除去组织样品中的脂肪。凝胶渗透色谱可用来除去那些能导致气相色谱柱柱效降低的大分子干扰物(如蜂蜡等酸碱不能破坏的大分子)，必要时可用手动层析柱对提取液进行初步净化。酸性、中性和碱性硅胶、氧化铝和弗罗里土可用于消除非极性和极性的干扰物质。活性炭柱能将PCDD/Fs以及非邻位氯取代的PCB77、PCB126和PCB169与其他同类物质和干扰物质分离，可在必要时使用。除了非邻位氯取代的PCB77、PCB126和PCB169外，其他DL-PCBs一般不需要活性炭柱净化。HPLC可以特异性地分离某些类似物和同系物。

通常在用酸化硅胶或凝胶渗透色谱除去组织样品中的类脂后，使用3根层析柱净化，即一根混合型硅胶柱和两根不同的氧化铝柱。也可以釆取其他备选净化方法，组合使用。无论采用何种组合，在进行净化前，实验室应证实其选择的净化过程能满足方法的要求。

文章来源：《食品安全国家标准汇编检验方法（一）》

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