5.2 试剂

5.2.1 除另有规定外，所有实验使用的试剂等级应为不含DNA和DNase的分析纯或生化试剂。条件许可的情况下推荐使用优级纯试剂。试剂的选购、验收、储存应符合GB/T 27025规定。

5.2.2 实验用水应符合GB/T 6682中一级水的规格。去离子水电阻应达到18.2Ω。

5.2.3 食用油脂中植物基因组DNA提取纯化试剂盒。

5.2.4 10×PCR缓冲液(不含氯化镁)。

5.2.5 氯化镁溶液：25 mmol/L。

5.2.6 dNTP溶液(dATP、dCTP、dGTP、dTTP或dUTP)：各2.5 mmol/L。

5.2.7 UNG酶(以dUTP代替dTTP时)。

5.2.8 Taq酶。

5.2.9 引物和探针：食用油脂中转基因植物成分实时荧光PCR定性检测所用引物序列和探针序列见表1，部分未列出外源基因可参见SN/T 1204。

表1 实时荧光PCR所用引物和探针序列

6 防止污染措施

防止污染措施应符合GB/T 19495.2的规定。

7 检测

7.1 对照设置

检测过程中应设置核酸提取空白对照、PCR扩增试剂对照、PCR扩增阴性目标DNA对照、PCR扩增阳性目标DNA对照，具体方式按照GB/T 19495.2中相关规定。

7.2 样品前处理

7.2.1 食用油脂中极性成分的萃取

取50 mL离心管4支，每支分别加入约25 mL双蒸水。每支分别加入等体积油样，充分振荡2 min(约300次)，7000g室温离心5 min，弃去上层油液。再次加入等体积油样，同上振荡、离心，并弃上层油液。按上述操作反复萃取至下层水相浑浊。在萃取过程中，如果油相和水相界面间出现较多白色物质，可在弃去上层油液后振荡以使白色物质分散，7000g室温离心5 min(压缩白色物质层)后，再加入等体积油样继续萃取。如离心后白色物质仍形成牢固斜面，则应用适宜的器具(如：洁净的不锈钢勺等)尽量去除，并补足双蒸水至约25 mL。萃取总量：初榨大豆油为400 mL～600 mL、初榨菜籽油为700 mL～1000 mL、初榨玉米油为700 mL～1000 mL、各种精炼油为3000 mL～5000 mL(建议用油量不超过5000 mL)。

7.2.2 萃取液的浓缩

全部转移萃取液(下层水相)于一直径15 cm～20 cm表面皿中，置电热恒温鼓风干燥设备(设置温度60℃～70℃)或其他快速干燥设备内充分干燥。也可采用真空干燥系统或其他等效方法。

7.3 DNA提取和纯化

建议选用北京望尔生物技术有限公司《食用油脂中植物基因组DNA提取纯化试剂盒》，也可选用其他等效市售试剂盒。提取和纯化后的DNA溶液长期保存应储存-20℃或低于-20℃。

相关链接：食用油脂中转基因植物成分实时荧光PCR定性检测方法（一）

文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

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