一 对LC的要求

在LC-MS的联用中，LC必须与MS相匹配，首先就是色谱流动相液流的匹配，包括液流的流速、稳定性等。由于质谱是在真空条件下工作，色谱流动相需经过蒸发气化的过程，为减轻质谱真空系统的负荷，同时避免溶剂对质谱仪器的损坏以及对待测试样的干扰，流动相的流速应控制在较低的范围，通常不能超过1mL·min-1，依接口的不同而略有差异。另外，LC必须提供高精度的输液泵，以保证在低流速下输液的稳定性。对于分析柱，则最好选用细内径的分离柱，与低流量LC相匹配，从根本上减轻LC-MS接口去除溶剂的负担。

二 对MS的要求

在LC-MS联用中，质谱仪器的真空系统必须具备很高的效率、大的排空容量，以利于将溶剂气最大限度地抽出质谱仪，避免引入质量分析系统，对待测试样的分析造成干扰。由于LC-MS采用软电离技术，所获试样离子信息多为分子离子峰，对试样的定性造成一定困难，因此好的质谱仪器可能提供多级MS串联使用，有利于获得丰富的结构信息。当然，为简化仪器结构、降低成本，质谱仪器最好能提供源内碰撞诱导解离功能（collisioninduceddissociation,CID)，以期获得试样更多的结构信息。质谱仪器应当具有较宽的质量测定范围，利于大分子、蛋白质等生物试样的分析。质谱仪器应当匹配多种接口，利于互换以适应不同的待测试样分析需求，如现在的质谱仪器普遍能够实现ESI接口和APCI接口的更换。

三 LC-MS分析方法

（一）LC分析条件的选择

LC分析条件的选择要考虑两个因素：使分析试样获得最佳分离并有利于其电离。如果二者发生矛盾，则需折中考虑。LC可调节的参数主要有流动相的组成和流速。在LC-MS联用的情况下，由于要考虑喷雾雾化和离子化，常规的LC体系并不一定适合，如正相体系和离子色谱体系难以用于LC-MS联用，前者由于流动相极性太小，试样难于电离，同时流动相和待测试样间的分离困难；后者由于广泛采用离子对试剂，容易堵塞毛细管喷口，因此也应用较少。对于传统的反相色谱体系，大多可很好地同MS联用，但也有些问题值得注意，许多体系并不适合用作LC-MS联用的流动相，包括无机酸、难挥发性盐（如磷酸盐）和表面活性剂等。无机酸和难挥发性盐在喷雾过程中会因为溶剂快速蒸发而在喷雾口或离子源内析出结晶，造成仪器损坏或污染，表面活性剂会降低体系的表面张力或与待测试样复合而影响其离子化。在较成熟也较可靠的LC-MS分析中，常用流动相体系由水、乙腈、甲醇、甲酸、乙酸、氢氧化铵和乙酸铵等组成。LC分离的最佳流量，往往超过电喷雾允许的最佳流量，此时需要采取柱后分流，以达到好的雾化效果。

（二）质谱条件的选择

质谱条件的选择主要是为了改善雾化和电离状况，提高检测的灵敏度。调节雾化气流量和干燥气流量可以达到最佳雾化条件，改变喷嘴电离电压和聚焦透镜电压等可以得到最佳灵敏度。对于多级质谱仪器，还要调节碰撞气流量和碰撞电压及多级质谱的扫描条件。

对于不同的试样应当根据试样的带电能力的不同、带电性质的差异，选择不同的质谱电离方式和工作模式。如极性试样，多电荷大分子试样蛋白质、氨基酸等，倾向于采用ESI电离模式；中等极性或非极性试样适合采用APCI电离模式。碱性试样或容易带正电荷的试样宜选用正离子模式（通常为ESI+,APCI+)检测，并可通过调节流动相体系的pH让试样尽可能带正电；酸性试样或容易带负电试样适合采用负离子模式（ESI-,APCI-）检测。对于无法判断试样可能的带电模式时，则应当在正、负离子模式下均对试样进行测试，然后再根据其他信息来判断。

（三）LC一MS定性、定量分析

LC-MS分析得到的质谱过于简单，结构信息少，进行定性分析比较困难，主要依靠标准试样定性，对于多数试样，保留时间相同，子离子谱也相同，即可定性。当缺乏标准试样时，为了对试样定性或获得其结构信息，必须使用串联质谱检测器，将准分子离子通过碰撞活化得到其子离子谱，然后解释子离子谱来推断结构。如果只有单级质谱仪，也可以通过源内CID得到一些简单的结构信息。

用LC-MS进行定量分析，其基本方法与普通液相色谱法相同。即通过色谱峰面积和校正因子（或标样）进行定量。但由于色谱分离方面的问题，一个色谱峰可能包含几种不同的组分，给定量分析造成误差。因此，对于LC-MS定量分析，不采用总离子色谱图，而是采用与待测组分相对应的特征离子得到的质量色谱图或多离子监测色谱图，此时，不相关的组分将不出峰，这样可以减少组分间的互相干扰。LC-MS所分析的经常是体系十分复杂的试样，比如血液、尿样等。试样中有大量的保留时间相同、相对分子质量也相同的干扰组分存在。为了消除其干扰，LC-MS定量的最好办法是采用串联质谱的多反应监测(multiplereactionmonitoring,MRM）技术。即对质量为m1的待测组分作子离子谱，从子离子谱中选择一个特征离子m2。正式分析试样时，第一级质谱选定m1，经碰撞活化后，第二级质谱选定m2。只有同时具有ml和m2特征质量的离子才被记录。这样得到的色谱图就进行了三次选择：LC选择了组分的保留时间，第一级MS选择了MI，第二级MS选择了m2，这样得到的色谱峰可以消除其他组分干扰。然后，根据色谱峰面积，采用外标法或内标法进行定量分析。此方法适用于待测组分含量低，体系组分复杂且干扰严重的试样分析。比如人体药物代谢研究，血样、尿样中违禁药品检测等。

采用MRM技术分析的例子，选定特征离子m/z309和m/x241后，利用MRM得到的质量色谱图。

四 LC-MS的灵敏度

与GC-MS相同，LC-MS的灵敏度是指在一定的试样、一定的分辨率下，产生特定信噪比的分子离子峰所需的试样量。LC-MS常采用利血平作为标准试样来测定其灵敏度，例如，配置一定浓度的利血平（如10pg/μL)，通过LC进适当量试样，以水和甲醇各50％为流动相（加入1％乙酸），作质量范围全扫描，提取利血平分子离子峰m/z609的质量色谱图，计算其信噪比，最终仪器的灵敏度用进样量和信噪比标定。

五 LC-MS的应用

以ESI和APCI接口为代表的LC-MS技术已经在药物、化工、环保、临床医学、分子生物学等许多领域中获得了广泛的应用。

我们实验室采用LC-MS联用（WatersZQ）测定蜂蜜、鸡蛋、牛奶等食品中的氯霉素（chloramphenicol,CAP)、甲砜霉素（thiamphenicol,THAP）残留总离子流色谱图和CAP,THAP质谱图。LC采用流动相梯度洗脱，梯度程序如下：0min:30％甲醇/70％水，5min:70％甲醇/30％水，8min;0％甲醇/30％水，15min:30％甲醇/70％水。质谱条件选用电喷雾负离子模式、选择离子扫描，锥孔电压：对m/z321,323为25eV;m/z354为30eV;m/zl52为45eV。氯霉素的最低检测限可达到0.2ng/g。