一、盐析法

在溶液中加入中性盐使固体溶质沉淀析出的过程称为盐析。许多生物物质的制备过程都可以用盐析法进行沉淀分离，如蛋白质、多肽、多糖、核酸等。盐析法在蛋白质的分离中应用最为广泛。

盐析法沉淀蛋白质的原理如下。

(1)中性盐离子破坏蛋白质表面水膜在蛋白质分子表面分布着各种亲水基团，如：-COOH、-NH₂、-OH，这些基团与极性水分子相互作用形成水化膜，包围于蛋白质分子周围，形成1～140nm大小的亲水胶体，削弱了蛋白质分子间的作用力，蛋白质分子表面的亲水基团越多，水膜越厚，蛋白质分子的溶解度也越大。当向蛋白质溶液中加入中性盐时，中性盐对水分子的亲和力大于蛋白质，它会抢夺本来与蛋白质分子结合的自由水，于是蛋白质分子周围的水化膜层减弱乃至消失，暴露出疏水区域，由于疏水区域的相互作用，使其沉淀。

(2)中性盐离子中和蛋白质表面电荷蛋白质分子中含有不同数目的酸性和碱性氨基酸，其肽链的两端含有不同数目的自由羧基和氨基，这些基团使蛋白质分子表面带有一定的电荷，因同种电荷相互排斥，使蛋白质分子彼此分离。当向蛋白质溶液中加入中性盐时，盐离子与蛋白质表面具相反电性的离子基团结合，形成离子对，因此盐离子部分中和了蛋白质的电性，使蛋白质分子之间电排斥力作用减弱而能相互聚集起来。

因为共沉淀的影响，盐析法的分辨率不高，但由于它成本低、操作简单安全，对许多生物活性物质有稳定作用，在生化分离中仍十分有用。

用于盐析的中性盐有硫酸盐、磷酸盐、氯化物等，其中硫酸铵、硫酸钠用得最多，尤其适用于蛋白质的盐析。盐析条件通过改变离子强度(盐的浓度)、pH值和温度来选定。

二、等电点沉淀法

两性电解质分子在电中性时溶解度最低，利用不同的两性电解质分子具有不同的等电点而进行分离的方法称为等电点沉淀法。氨基酸、核苷酸和许多同时具有酸性和碱性基团的生物小分子以及蛋白质、核酸等生物大分子都是两性电解质，控制在等电点的pH值，加上其它的沉淀因素，可使其以沉淀析出。此法常与盐析法、有机溶剂和其它沉淀剂一起使用，以提高分离能力。