A.7.4.4 标准溶液的配制

吸取2mL 1%的试样溶液移入100mL容量瓶中，稀释至刻度，摇匀，该溶液为标准溶液。

A.7.4.5 标准洗出液的制备

用微量进样器吸取标准溶液100uL,均匀地点注在离滤纸底边25mm的一条基线上,用吹风机吹干。将滤纸放入装有预先配制好展开剂的层析缸中展开，待展开剂前沿线上升40mm,取出用冷风吹干，剪下所有展开的染料部分，按A.7.4.3的方法进行操作，得到标准洗出液。用10mm比色皿在最大吸收波长处测吸光度值。

同时用空白滤纸在相同条件下展开，按相同方法操作后测洗出液的吸光度值。

A.7.4.6 结果计算

副染料的质量分数以W7计，数值用％表示，按公式(A.8)计算:

式中：

A1...Aa—各副染料洗出液以50mm光径长度测定出的吸光度值；

b1...bn—各副染料对照空白洗出液以50mm光径长度测定出的吸光度值；

As—标准洗出液以10mm光径长度测定出的吸光度值；

bs—标准对照空白洗出液以10mm光径长度测定出的吸光度值；

5—折算成以10mm光径长度的比数；

100/2—标准洗出液折算成1%试样溶液的比数；

S—试样的质量分数％。

计算结果表示到小数点后1位。

平行测定结果的绝对差值不大于0.2%(质量分数)，取其算术平均值作为测定结果。

A.8 未反应中间体总和的测定

A.8.1 方法提要

采用反相液相色谱法，用外标法分别定量各未反应中间体，最后计算未反应中间体的总

A.8.2 试剂和材料

A.8.2.1 甲醇。

A.8.2.2 乙酸铵溶液：2g/L。

A.8.2.3 1-乙酰氨基-8-萘酚-3,6-二磺酸。

A.8.2.4 1-氨基-8-萘酚-3,6-二磺酸。

A.8.2.5 对氨基苯磺酸。

A.8.3 仪器和设备

A.8.3.1 液相色谱仪：输液泵-流量范围0.1mL/min～5.0mL/min,在此范围内其流量稳定性为±1%检测器一多波长紫外分光检测器或具有同等性能的紫外分光检测器。

A.8.3.2 色谱柱：长；为150mm,内径为4.6mm的不锈钢柱，固定相为C₁₈、粒径5um。

A.8.3.3 色谱工作站或积分仪。

A.8.3.4 超声波发生器。

A.8.3.5 定量环：20uL。

A.8.4 色谱分析条件

A.8.4.1 检测波长：254nm。

A.8.4.2 柱温：40℃。

A.8.4.3 流动相：A,乙酸铵溶液；B,甲醇；

浓度梯度：50min线性浓度梯度从A(100)比B(0)至A(0)比B(100)。

A.8.4.4 流量：1mL/min。

A.8.4.5 进样量：20uL。

可根据仪器不同，选择最佳分析条件，流动相应摇匀后用超声波发生器进行脱气。

A.8.5 试样溶液的配制

称取约0.01g新红试样(精确至0.0001g),加乙酸铵溶液溶解并定容至100mL。

A.8.6 标准溶液的配制

称取约0.01g(精确至0.0001g)置于真空干燥器中干燥24h后的1-乙酰氨基-8-萘酚-3,6-二磺酸，用乙酸铵溶液溶解并定容至100mL。再吸取此溶液10mL,用乙酸铵溶液定容至100mL,以此作为标准溶液A。

称取约0.01g(精确至0.0001g)置于真空干燥器中干燥24h后的1-氨基-8-萘酚-3,6-二磺酸，用乙酸铵溶液溶解并定容至100mL。再吸取此溶液10mL,用乙酸铵溶液定容至100mL,以此作为标准溶液B。

称取约0.01g(精确至0.0001g)置于真空干燥器中干燥24h后的对氨基苯磺酸，用乙酸铵溶液溶解并定容至100mL。再吸取此溶液10mL,用乙酸铵溶液定容至100mL,以此作为标准溶液C。

然后分别吸取10.0mL、5.0mL、2.0mL、1.0mL上述标准溶液A、标准溶液B和标准溶液C,分别用乙酸铵溶液定容至100mL,配制成A系列标准溶液、B系列标准溶液和C系列标准溶液。

A.8.7 分析步骤

在A.8.4规定的色谱分析条件下，分别用微量注射器吸取试样溶液及系列标准溶液注入并充满定量环进行色谱检测，待最后一个组分流出完毕，进行结果处理。测定各系列标准溶液物质的峰面积，分别绘制成标准曲线A、标准曲线B、标准曲线C。测定试样溶液中1-乙酰氨基-8-萘酚-3,6-二磺酸、1-氨基-8-萘酚-3,6-二磺酸和对氨基苯磺酸的峰面积,根据各标准曲线计算各未反应中间体的含量。

A.8.8 结果计算

未反应中间体的总和以质量分数W11计，数值用％表示，按公式(A.9)计算：

W11=W8+W9+W10------------(A.9)

式中：

W8—1-乙酰氨基-8-萘酚-3,6-二磺酸的质量分数％；

W9—1-氨基-8-萘酚-3,6-二磺酸的质量分数％；

W10—对氨基苯磺酸的质量分数％。

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文章来源：《食品安全国家标准汇编食品添加剂(一)》

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