6.2.4.1 适用范围

适用于河豚鱼和鳗鱼中林可霉素、竹桃霉素、红霉素、替米考星、泰乐菌素、螺旋霉素、吉他霉素和交沙霉素残留量的液相色谱-串联质谱测定。方法检出限：河豚鱼中的林可霉素、竹桃霉素、红霉素、替米考星、泰乐菌素、螺旋霉素、吉他霉素和交沙霉素均为2.0μg/kg。鳗鱼中的林可霉素、红霉素、泰乐菌素、吉他霉素均为2.0ug/kg，螺旋霉素、竹桃霉素、交沙霉素、替米考星均为5.0μg/kg。

6.2.4.2 方法原理

河豚鱼和鳗鱼中林可霉素、竹桃霉素、红霉素、替米考星、泰乐菌素、螺旋霉素、吉他霉素和交沙霉素的残留用Tris缓冲溶液提取后，经OasisHLB固相萃取柱净化，甲醇洗脱，洗脱液浓缩定容后，液相色谱-串联质谱法测定，内标法定量。河豚鱼中的林可霉素、竹桃霉素、红霉素、替米考星、泰乐菌素、螺旋霉素、吉他霉素和交沙霉素均为2.0μg/kg。鳗鱼中的林可霉素、红霉素、泰乐菌素、吉他霉素均为2.0μg/kg，螺旋霉素、竹桃霉素、交沙霉素、替米考星均为5.0μg/kg。

6.2.4.3 试剂和材料

甲醇、乙腈：色谱纯；乙酸铵、三羟甲基氨基甲烷(tris，C₄H₁₁NO₃)、氯化钙(CaCl₂·2H₂O)、盐酸：分析纯。

甲醇溶液：2+3。400mL甲醇与600mL水混合；0.01mol/L乙酸铵溶液：0.77g乙酸铵溶解于水中，定容于1000mL容量瓶中；定容液：0.01molL乙酸铵溶液+乙腈(17+3，v/v)；tris溶液：称取12.0g三羟甲基氨基甲烷、7.35g氯化钙溶解于1000mL水中，用盐酸调节pH为9。

标准物质纯度≥95%。

标准储备溶液I：1.0mg/mL。依次准确称取每种标准物质适量，分别放入相应的10mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，混匀。4℃保存；标准储备溶液II：10.0ug/mL。依次吸取0.1mL各标准储备溶液I，分别放入相应的10mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度。4℃保存。

标准工作溶液：2.0ug/mL。依次吸取2.0mL混合标准储备溶液II，分别放入相应的10mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度。

内标储备溶液：1.0mg/mL。准确称取10.0mg罗红霉素于10mL容量瓶中，用甲醇溶解定容至刻度，混匀。4℃保存。

中间浓度内标溶液：10.0μg/mL。吸取0.1mL内标储备溶液于10mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度。4℃保存。

内标工作溶液：1.0μg/mL。吸取1.0mL中间浓度内标标准溶液于10mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度。

测定河豚鱼用基质标准混合工作溶液：分别吸取1.0μL、2.0μL、5.0μL、25.0μL标准工作溶液，依次加入相应的试剂瓶中，再分别加入20.0μL内标工作溶液，用样品空白提取液定容至1.0mL。配成林可霉素、竹桃霉素、红霉素、替米考星、泰乐菌素、螺旋霉素、吉他霉素和交沙霉素分别为2.0ng/mL、4.0ng/mL、10.0ng/mL、50.0ng/mL的四个浓度水平的系列基质标准混合工作溶液；

测定鳗鱼用基质标准混合工作溶液：分别吸取林可霉素、红霉素、泰乐菌素、吉他霉素各1.0uL、2.0μL、5.0uL、25.0uL标准工作溶液和螺旋霉素、竹桃霉素、交沙霉素、替米考星各2.5uL、5.0uL、10.0μL、25.0μL标准工作溶液，依次加入相应的试剂瓶中，再分别加入20.0μL内标工作溶液，用样品空白提取液定容至1.0mL。配成林可霉素、红霉素、泰乐菌素、吉他霉素分别为2.0ng/mL、4.0ng/mL、10.0ng/mL、50.0ng/mL和螺旋霉素、竹桃霉素、交沙霉素、替米考星分别为5.0ng/mL、10.0ng/mL、20.0ng/mL、50.0ng/mL的四个浓度水平的系列基质标准混合工作溶液。

OasisHLB固相萃取柱：500mg、6mL，或相当者。使用前，先后用10mL甲醇和10mL水活化，在抽真空前的各步骤中，都保持柱体湿润。

6.2.4.4仪器和设备

液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源；天平：感量0.01g，0.0001g；固相萃取装置；氮气浓缩仪；具塞聚丙烯离心管：50mL；离心机：20000g离心力(或相当于12000r/mi)；超声波清洗仪；pH计；振荡器。

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文章来源：《兽药多组分残留分析技术》

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