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培养基 | 酵母膏:5.0,蛋白胨:10.0,NaCl:10.0,pH:7.0(25℃) |
传代方法 | 1.溶解: 收到质粒干粉后,请加入 20μl 无菌水至管底,溶解质粒,室温静置 1min; 2.混合(吸附质粒): 200μl 感受态细胞 + 质粒 DNA 5~10μl 混匀,冰上放置 30min; 3.热激导入: 42℃静置 90s; 4.收缩膜孔: 冰浴 2min; 5.修复培养: 毎管加 800μl LB 液体培养基,37 ℃培养 1h 150 r/min; 6.筛选培养: 将适当体积(100 μl)的复苏细胞,涂布在相应抗性的 LB 平板上,正置平皿 30min(琼脂面务必干燥后), 倒置培养 12-16h,出现菌落。 7.提取: 挑取单克隆菌落至相应抗性 LB 液体培养基中,震荡培养 12-16h,根据试验需要提取质粒。 |
生长条件 | LB +氨苄青霉素,37℃(克隆菌株Stbl3,8787bp) |
存储条件 | 2-8℃ |
安全等级 | 1 |
应用领域 | plvx-acgfp1-n1是HIV-1,慢病毒表达载体,表达融合绿色荧光蛋白AcGFP1。基因克隆到多克隆位点(MCS),位于上游的AcGFP1编码序列,表示为N端融合的AcGFP1蛋白融合蛋白的表达是由组成型活性的人类巨细胞病毒驱动早期启动子(CMV)位于上游的MCS。慢病毒颗粒包含AcGFP1的融合蛋白在几乎任何类型的细胞表达,包括原代细胞。 |
共享方式 | 公益性共享 |
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