大型底栖无脊椎动物，指栖息生活在水体底部淤泥内或石块、砾石的表面或其间隙中，以及附着在水生植物之间的肉眼可见的水生无脊椎动物。一般认为体长超过2 mm，不能通过40目分样筛的种类。它们广泛分布在江、河、湖、水库、海洋和其它各种小水体中。它们包括许多动物门类。主要包括水生昆虫（aquatic insecta )、大型甲壳类（macrocrus taceans)、软体动物（mollusks)、环节动物（annelids)、圆形动物（roundworms)、扁形动物（flatworms）以及其它无脊椎动物（ aquatic invertebrates)。

1．试剂及设备器材

（1)试剂

甘油；

加拿大树胶；

普氏（(Puns）胶：用阿拉伯胶8g，蒸馏水10 ML，水合氯醛30 g，甘油7 mL，冰醋酸3 mL配制而成。配制时，先在烧杯中用蒸馏水溶解阿拉伯胶，置于80℃恒温水浴，用玻璃棒搅动，胶溶后，依次加入其他各物，用玻璃棒搅拌均匀，然后以薄棉过滤即成。

(2）设备器材

分样筛：(40目，孔径0.635 mm)、培养皿若干、细吸管若干、尖嘴镊若干、解剖针若干、标本瓶若干、解剖镜、显微镜、普通药物天平、扭力天平。

2．实验室处理程序

(1)样品的再清洗

通常现场采样的时间安排比较紧凑，经常存在样品就地清洗不彻底的情况。如果样品中还含有淤泥等容易引起水体浑浊的杂质，就会给标本分选时带来困难，造成视场不清晰。所以在分选前，还应将样品反复淘、过筛(40目），直至澄清。一方面可以去除淤泥，洗净样品；另一方面可以部分洗脱固定剂，保护分选操作人员的健康（尤其是固定剂为福尔马林溶液时）。清洗用福尔马林溶液固定的样品时，洗液应回收并集中统一处理。

(2）样品的分样

一般而言，较大型的螺、蚌、蜻蜓稚虫等大型底栖无脊椎动物可全部拣出，较小型的摇蚊等、水栖寡毛类等大型底栖无脊椎动物要全部拣出工作量太大，没有必要，可进行分样处理。

分样前，应先随机取少量样品镜检观察，根据该样品的生物密度大致预估分样量。分样时，必须将某点所采集到的全部底栖样品充分混合均匀后，按二分法逐级减少取样量（如1/2样、1/4样、1/8样、1/16样等），使每份样中的生物个体为20~50个。

(3）标本的挑拣

直接用肉眼分选样品，容易造成某些小个体物种（如线虫、仙女虫等）的遗漏，因此最好选用解剖镜。解剖镜下分选时，将样品放入培养皿中加入少量水，使视场内样品舒展开，避免因植物残屑的缠裹掩埋引起底栖动物标本的漏拣。镜选时的放大倍数可根据个人的适宜度调节，放大倍数过高、视野窄，影响分选效率；放大倍数过低，又容易漏拣部分小个体的生物标本。

用细吸管、尖嘴镊、解剖针等逐份挑拣分样样品，当有形态大小各异的个体拣出时，进行下一份分样挑拣，直至没有新的形态大小各异的个体拣出时，可停止挑拣，同时必须保证拣出的标本个数≧100个。记录挑拣的分样份数。

如分选过程中发现小个体或罕有生物样品时，应立即单独分装保存，避免与其它大量生物样混杂后遗失。

样品标本的挑拣周期不宜超过2天，且当日工作结束时应将待挑拣样品冷藏保存。

(4）标本的固定与保存

软体动物可用5％甲醛溶液或75％乙醇溶液固定，用75％乙醇溶液保存。

水生昆虫可用5％乙醇溶液固定，数小时后移入75％乙醇溶液中保存。

水栖寡毛类应先放入培养皿中，加少量清水，并缓缓滴加数滴75％乙醇溶液将虫体麻醉，待其完全舒展伸直后，再用5％甲醛溶液固定，用75％乙醇溶液保存。
上述固定和保存液的体积应为所固定动物体积的10倍以上，否则应在2-3天后更换一次。

(5）标本的物种鉴别

根据实验室积累的系统分类学检索资料及参考标本进行物种检索分类和参考标本实物比对，标本的物种鉴别尽可能到属种，不能到种的也尽可能区分为不同的种。

底栖动物标本的鉴定多因缺乏系统的资料而有较大的难度。水生昆虫幼虫，例如摇蚊幼虫，要确切鉴定到种，需有生活史资料，应以成虫为根据，这需要进行幼虫的培养。摇蚊幼虫（以及其他水生昆虫幼虫或稚虫）皆以末龄期的形态为种的依据。水栖寡毛类中的颤卿种类，只有成熟时（形成环带）才能识别。

通常，水生昆虫除摇蚊科及其他少数科属外，皆可在解剖镜下鉴定到属，在低倍镜下确定目、科，在高倍镜下对照资料鉴定到属。摇蚊科幼虫主要依据头部口器结构的差异来定属、种，并需制片，用甘油透明观察。优势种类或其他因有异议而需要观察和研究的种类，可用Puris胶封片，可保存1年至3年。

(6）标本物种的结果统计

每个采样点所采得的底栖动物应按不同种类准确地统计个体数，在标本己有损坏的情况下，一般只统计头部，不统计零散的腹部、附肢等。

每个采样点所采得的底栖动物应按不同种类准确地称重。软体动物可用普通药物天平称重，水生昆虫和水栖寡毛类应用扭力天平称重。待称重的样品必须符合下列要求：

已固定10天以上；

没有附着的淤泥杂质；

标本表面的水分已用吸水纸吸干；

软体动物外套腔内的水分已从外面吸干；

软体动物的贝壳没有弃掉。

(7）标本的标识和记录

标本标识应包括以下内容：

标本的名称、学名及门类；

采样时间及地点；

标本编号；

固定剂成分；

鉴定日期；

鉴定及确认人员签名等。

3．结果表达

应分析软体动物、水生昆虫和水栖寡毛类的种类组成，按分类系统列出名录表，并标明物种密度和生物量，同时统计总的及各大类群大型底栖无脊椎动物分类单元数、总物种密度、总生物量等。

4．质量保证和质量控制

（1)标本挑拣

在挑拣完后剩余的残渣中，质控员对每个挑拣人员选取10％的分样抽检，如质控员挑拣出的标本数小于挑拣人员挑出标本数的10%，则该份样品合格，否则，进行第二次抽检，如仍不合格，则该样品需重新挑拣。

实验室挑拣工作完成后，所有挑拣工具需进行彻底清洗检查，将残留在其中的标本放入相应的标本收集容器中。

(2）标本鉴定

实验室需建立、积累和更新自己的系统分类学检索资料库及参考标本库，参考标本要有外部分类学专家确定和签名，要保证其固定剂质量，定期更换。

每一个鉴定出的物种需由第二个分类鉴定员复检确认并做好记录。遇到本实验室无法确认的标本需外送鉴定时，要做好外送的日期、目的地、返还日期和鉴定人的姓名等信息记录。

每个分类鉴定员均需定期参加分类学培训及考核，增强分类技能，确保物种的准确鉴定。