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1.碘量法
样品经处理后,取一定量样液于碘量瓶中,加入一定量过量的碘液和过量的氢氧化钠溶液,样液中的醛糖在碱性条件下被碘氧化为醛糖酸钠;反应液中过量的碘和氢氧化钠作用生成次碘酸钠,加入盐酸反应液呈酸性时碘析出。用硫代硫酸钠标准溶液滴定析出的碘,则可计算出氧化醛糖消耗的碘量,从而计算出样液中醛糖的含量。
I2+2NaOH——NaIO+NaI+H2O
NaIO+NaI+2HCI——I2+2NaCl+H2O
I2+2Na2S2O3——Na2S4O6+2NaI
在一定范围内,上述反应是完全按化学反应式定量进行的,因此,可以利用化学反应式进行定量计算,而不用经验检索表。从反应式可计算出1mmol碘相当于葡萄糖180mg;麦芽糖42mg;乳糖360mg。本法适用于各类食品,如硬糖、异构糖、果汁等样品中葡萄糖的测定,用于醛糖和酮糖共存时单独测定醛糖。
注意事项
①本法自使用以来,在碱性试剂的选择、反应体系的碱度、反应温度等方面进行了多次改进,主要是为防止酮糖氧化,降低共存的酮糖的影响,同时使碱性条件下醛糖与碘的反应完全按当量反应式进行,以便于计算。
②当样品中含有乙醇、丙酮等成分时,会消耗碘,影响测定结果,应对样品进行处理。
③碘量法分常量法和微量法,主要区别在于测定时样液用量、试剂浓度及用量不同。常量法用样液量20~25mL,样液含醛糖0.02%~0.45%;微量法用样液量5mL,检出量为O.25~1mg。
④此法配合直接滴定法,也可用于葡萄糖和果糖共存时果糖的测定。先用碘的碱性溶液把葡萄糖氧化,过量的碘用硫代硫酸钠溶液滴定除去,然后再用直接滴定法测定果糖的含量。
2.3,5一二硝基水杨酸(DNS)比色法
还原糖在氢氧化钠和丙三醇存在时,将3,5一二硝基水杨酸中的硝基还原为氨基,形成3一氨基一5一硝基水杨酸,在过量氢氧化钠碱性溶液中,该物质呈橘红色,并在540nm波长处有最大吸收值,其吸光度与还原糖含量呈线性关系。
本法适用于各类食品中还原糖的测定,具有准确度高、操作简单、快速等特点,特别适合大批样品的测定,分析结果与直接滴定法基本一致。
注意事项
①本方法自提出后,对3,5一二硝基水杨酸试剂的组成和配制比例进行了多次改进,现在普遍使用的配方是:6.5g3,5二硝基水杨酸溶于少量水中,移入1000mL容量瓶中,加入2mol/L。氢氧化钠溶液325mL,再加45g丙三醇,摇匀,冷却定容。
②对于酸性样品可用2%氢氧化钠溶液调制中性。
③试剂不宜放置过久,以免影响结果准确性。
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