在农业生产中,会在很长的一段时间内使用化学农药,如果不按规定的用药 量、次数、方法或安全间隔期施药,或施用了不该使用的农药,就会引起农药超标或 农药中毒。

食物中毒发生后,快速筛查出是否是由有机磷或氨基甲酸酯类的农药或鼠药 所致,对于及时抢救伤者具有重要意义。

在以往发生的农药中毒案例中，由有机磷或氨基甲酸酯类引起的占95%以 上，因此是农药检测的重点。

［检测原理］

本实验是利用酶抑制法进行检测，酶抑制法是根据有机磷和氨基甲酸酯类农 药对动物体内乙酰胆碱酯酶活力的抑制作用,通过计算待测样品对乙酰胆碱酯酶活力的抑制率,定性判断其中是否含有有机磷农药或氨基甲酸酯类农药及其存在 总量的一种快速初筛方法。

本法利用在一定条件下,酶催化乙酰胆碱水解,水解产物与显色剂反应生成黄 色物质,该物质在412nm处被吸收,测定吸光度随时间的变化值,计算出抑制率。 当检测出的抑制率≤50%时属于阴性（总量不超标），当检测出的抑制率＞50%时 属于阳性（总量超标）。

本标准规定了由酶抑制法测定蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速检验方法。本标准适用于蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速筛选测定。

［仪器］

CL-BⅢ四通道残留农药测定仪（上海复博）。

［操作步骤］

（1）试剂配制

提取液:pH8.0的缓冲溶液；

酶试剂：乙酰胆碱酯酶；

显色剂:二硫代二硝基苯甲酸；

底物:硫代乙酰胆碱。

（2）仪器设置

①开机设置。

②调0/100：

按“ ”（开始对照分析）键,等待3~5s；

按“100”键,调“100”成功；

放入黑块,等待3 ~ 5s ；

按“0”键,调“0”成功；

按“”（结束分析）键；

拿出黑块。

注:每个通道都要如此操作一次。

③空白对照

用大移液枪抽取2. 5mL提取液放入试管中；

用小移液枪取0. ImL酶试剂加入试管中；

用小移液枪取0. ImL显色剂加入试管中；

用小移液枪取0. ImL底物加入试管中；

迅速摇匀试管中混合液体并倒入比色皿；

放入比色池；

按“开始对照分析”键；

等待对照结束。

注:提取液、酶试剂、显色剂、底物的加入顺序一定要正确！

④装入对照——本地对照库（检测普通的蔬菜）

按“装入对照分析”键；

选择所需对照；

选择需要装入对照的通道号（在通道号码前打√）;

按“读取”键完成装入工作;

⑤样品检测

用天平称取1g果蔬；

剪成1cm见方；

放入烧杯中,用大移液枪抽取5mL提取液加入到烧杯中；

静置15min(或振荡1min);

用大移液枪从烧杯中抽取2.5mL浸泡液移至空试管中；

用小移液枪取0.1mL酶试剂加入试管中；

用小移液枪取0.1mL显色剂加入试管中；

静置15min;

用小移液枪取0.1mL底物加入试管中；

迅速摇匀并倒入比色皿；

放入比色池；

按“开始样品分析”键；

等待检测结果。

⑥保存检测结果

样品结束后,系统自动弹出“检测结果”对话框；

选择该通道所测蔬菜名；

填写(选择)被检单位和生产单位；

填写(选择)检测单位；

按“保存”键,保存检测结果。

［注意事项］

(1)葱、蒜、萝卜、韭菜、芹菜、香菜、菱白、蘑菇及番茄汁液中，含有对酶有影响 的植物次生物质,容易产生假阳性。处理这类样品时,可采取整株(体)蔬菜浸提。 对一些含叶绿素较多的蔬菜,也可采取整株(体)蔬菜浸提的方法,减少色素的干 扰。大米、小米、麦片、葡萄干、黄豆等样品处理方法略有不同。

(2)检测用水需为蒸馏水或去离子水。检测所用全部玻璃器具和塑料器具都 可反复使用,但使用前必须用洗涤液浸泡后,用自来水冲洗5遍,再用蒸馏水清洗2 遍,干燥后使用。

(3)比色瓶放入比色瓶槽前必须用随机所带的比色瓶清洗布或柔软的纸擦净 比色瓶表面,并排除溶液中的气泡。

(4)蔬菜不能剪切得太小,一般以1cm见方为好。

(5)对于颜色深得蔬菜尽量取茎、叶各一半为好。

(6)对于有味蔬菜可以使用检测软件的对照标样库来检测。

(7)移液器的枪头不能互相污染。

(8)用移液器将试剂加入检液时,一定要保证枪头垂直于液面,不能将试剂加到试管壁上。

相关链接：食用果蔬快速检测技术的研究现状

文章来源：《食品快速检测实训教程》

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