1 范围

本标准规定了蜂产品中链霉素、双氢链霉素残留量的液相色谱串联质谱测定方法。

本标准适用于蜂蜜、蜂王浆和王浆冻干粉中链霉素、双氢链霉素残留量的检测。

2 试样制备与保存

取500 g代表性蜂蜜样品，未结晶的样品将其用力搅拌均匀，有结晶析出的样品可将样品瓶盖塞紧后，置于不超过60℃的水浴中温热，等样品全部融化后搅匀，迅速冷却至室温。在融化时应注意防止水分挥发。制备好的试样均分成两份，分别装入样品瓶中，密封，并标明标记。一份作为试验样，另一份在-18℃下保存。

取500 g代表性蜂王浆样品，在室温下解冻，等样品全部融化后搅匀，将试样均分成两份，分别装入样品瓶中，密封，并标明标记。一份作为试样，另一份于-18℃保存。

在制样的操作过程中，应防止样品污染或发生残留物含量的变化。

3 方法提要

试样采用稀磷酸溶解提取(蜂王浆样品需加三氯乙酸沉淀蛋白质)，经高速离心后再用阳离子交换柱和Oasis(HLB)固相萃取小柱净化，液相色谱串联质谱测定，子离子丰度比定性，外标法定量。

4 试剂和材料

除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为二次蒸馏水。

4.1 甲醇：高效液相色谱级。

4.2 正己烷：高效液相色谱级。

4.3 乙腈：高效液相色谱级。

4.4 磷酸：85％。

4.5 冰乙酸。

4.6 三氯乙酸。

4.7 庚烷磺酸钠：高效液相色谱级。

4.8 叔丁基甲醚。

4.9 饱和氢氧化钠溶液。

4.10 0.3％乙酸水溶液：移取3 mL冰乙酸，用水定容至1 000 mL。

4.11 0.3％乙酸乙腈溶液：移取3 ml、冰乙酸，用乙腈定容至1 000 mL。

4.12 叔丁基甲醚＋正己烷溶液：(4+1，体积比)。

4.13 磷酸溶液(pH=2)：1000 mL水中滴加磷酸，调节溶液pH为2。

4.14 0.2 mol/L，磷酸盐缓冲溶液(pH=8)：称取33.46g磷酸氢二钾和1.05g磷酸二氢钾于950mL水中，用磷酸调节溶液pH为8，加水定容至1000mL。

4.15 50％三氯乙酸溶液：称取100 g三氯乙酸溶于适量水，并用水稀释至100 mL。

4.16 0.5 mol/L庚烷磺酸钠溶液：称取11 g庚烷磺酸钠溶于适量水，并用水稀释至100 mL。

4.17 0.01 mol/L庚烷磺酸钠酸溶液(pH =3.3)：称取0.22 g庚烷磺酸钠溶于90 mL水中，用乙酸调节溶液pH为3.3，并用水稀释至100 mL。

4.18 链霉素硫酸盐标准品(streptomycin sulfate, CAS号：3810-74-0，分子式：C₂₁H₄₁N₇O₁₆S)：纯度≥95.8％。

4.19 双氢链霉素硫酸盐标准品(dihydrostreptomycin sulphate, CAS号： 5490-27-7，分子式：C₂₁H₄₁N₇O₁₂X3/2H₂OX 3H₂O)：纯度≥99%。

4.20 链霉素标准储备溶液：分别称取经折算相当于0.0100g链霉素的标准品(4.18)，用水溶解定容至100 mL，溶液浓度为100 ug/mL。1℃～4℃冷藏保存，保存期1个月。

4.21 双氢链霉素标准储备溶液：分别称取经折算相当于0.010 0 g双氢链霉素的标准品(4.19)，用水溶解定容至100 mL溶液浓度为100 ug/mL。1℃～4℃冷藏保存，保存期1个月。

4.22 空白样品提取液：用不含链霉素、双氢链霉素的蜂蜜或蜂王浆样品，按照6.1和6.2制备空白样品溶液。

4.23 标准工作溶液：根据需要用空白样品溶液将标准储备液稀释成15 ng/mL、25 ng/mL、50 ng/mL、250 ng/mL、300 ng/mL的混合标准工作溶液，相当于样品中含有6 ug/kg、10 ug/kg、20 ug/kg、100 ug/kg、120 ug/kg链霉素和双氢链霉素，现配。

4.24 苯磺酸型固相萃取柱：500 mg、3 mL，或相当者。用5 mL甲醇和10 mL水预洗。

4.25 Oasis(HLB)固相萃取柱：500 mg、6 mL或相当者。用10 mL甲醇和10 mL水预洗。

5 仪器和设备

5.1 液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源。

5.2 旋转蒸发器。

5.3 pH计。

5.4 离心机：7000r/min。

5.5 旋涡混匀器。

5.6 固相萃取装置。

文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

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