3.4 测定步骤

3.4.1 提取

称取试样约5g(精确到0.1g)于离心瓶内，加25 mL二氯甲烷-冰乙酸提取剂，振荡45 min，振荡频率为180次/min离心5 min，转速为2000 r/min。将上清液转移至凯氏瓶中，转移时，用离心瓶塞挡住任何浮渣(果仁皮)流出。再用25 mL提取剂做第2次提取，用20 mL提取剂做第3次提取(第3次提取的振荡时间减为20 min)。合并全部上清液于凯氏瓶中。

3.4.2 蒸发

加4粒玻璃珠于上述凯氏烧瓶中，在风力强劲的通风柜中，用电调压器和电热套，蒸发凯氏烧瓶中的溶剂。初始蒸发阶段，电压限定在140 V,以防喷溅，蒸发到液量约为10 mL以下时，电压调定到160 V继续加热蒸发，直至残留的油脂或者固体残渣的颜色变为棕黑色或黑色为止，取出，放冷约2 min。为确保安全，整个蒸发期间，周围不得使用明火。

3.4.3 消化

3.4.3.1 炭化

于上述凯氏烧瓶中，加入2 mL浓硫酸(残渣为油脂时，加2.5 mL浓硫酸)，再置凯氏瓶于通风柜里的电热套中，加热炭化残渣，电压限定在160V，以防过热，对油脂残渣而言，炭化到刚产生大量黑色泡沫为止，取出，放冷2 min。

3.4.3.2 消化

加入10 mL过氧化氢于上述凯氏瓶中，置凯氏瓶于通风柜里的电热套中，加热消化残渣，电压限定在160 V，以防反应过于激烈，至过氧化氢作用完全时，立即取出(不得延误，延误将导致硫酸熬干)，放冷2 min。重复加过氧化氢，直至消化液变为无色透明时为止，取出，放冷2 min。

注：对油脂残渣而言，在过氧化氢第一次作用完全时，出现激烈的炭化反应，同时产生大量的黑色泡沫，此时应立即取出凯氏瓶，放冷2 min，然后再从加过氧化氢开始，重复消化操作。过氧化氢作用完全时，反应的激烈程度，一次比一次缓和，产生的黑色泡沫的量，一次比一次少。未消化掉的残液的颜色，也一次比一次浅，由最初的黑色，变为深棕色、浅棕色、黄色、浅黄色直至最后消化完全时，残液变为无色。

3.4.3.3 消化凯氏瓶颈上的残留物

加入20 mL过氧化氢于上述凯氏瓶中，凯氏瓶放回通风柜里的电热套中，电压调定到200 V，消化至溶液冒白烟，呈透明无色，无任何微小气泡时为止，以确保过氧化氢被完全分解，并确保硫酸不被挥发至干。取出凯氏瓶，放冷后，供配制原子吸收测试溶液用。

3.4.4 标准工作溶液的消化

按5g试样量计算，从浓度为0. 0100mg/mL的氧化苯丁锡标准工作溶液中，准确吸取0.00,0.10,0.20,0.30,0.40 mL(相当于试样中氧化苯丁锡含量为0.00,0.20,0.40,0.60,0.80 mg/kg)，分别放入一组编号的凯氏烧瓶中，各加入4粒玻璃珠，在风力强劲的通风柜中，用电热套和电调压器，电压调定在140 V，加热挥发凯氏烧瓶中的溶剂至干，取出放冷，加入0.5 mL浓硫酸，20 mL过氧化氢，电压调定在200 V，加热消化，消化至溶液冒白烟，呈透明无色，无微小气泡时为止，以确保过氧化氢被完全分解，并确保硫酸不被挥发至干。取出凯氏瓶，放冷后，供配制原子吸收测试溶液用。

3.4.5 原子吸收测试溶液的配制

3.4.5.1 消化残液的溶解和定量转移

分3次，每次5 mL水，分别溶解、洗涤凯氏烧瓶中的标准和试样的消化残液，定量转移至比色管中，供降低酸度和定容使用。

3.4.5.2 降低测试溶液的酸度并定容

降低酸度操作，应逐一在比色管中进行，以防止指示剂过早加入而失效。往比色管中加入6滴甲基紫指示剂，摇匀，用10 mol/L的氢氧化钠溶液，分次加入，降低溶液的酸度，并不断用流水冷却比色管，溶液由黄色，变为黄绿色、绿色直至蓝色为止。降低酸度的操作，必须一次完成，中间不得中断，否则指示剂在低酸度条件下很快退色失效，使降低酸度的操作失败。为确保酸度不会降低过头显碱性，用广范pH试纸检验一下调酸后的溶液，试纸显示酸色即可。再加入5 mL碘化钾溶液，用水稀释至25 mL刻度线，摇匀，静置5 min后，进行原子吸收测定。

3.4.6 测定

3.4.6.1 原子吸收测定条件

配有氢化物发生系统、外焰加热石英管原子化器的原子吸收分光光度计的测定条件如下：

a)波长：224.6 nm;

b)狭缝宽度：1.30 nm；

c)灯电流：12.5 mA;

d)火焰：空气-乙炔焰；

e)燃气流量：2.0 L/min;

f)空气压强：160 kPa ;

g)空气流量:15.0 L/min;

h)时间恒定值：2.00 s ;

i)测量时间：15.0 s;

j)延迟时间：5s;

k)测量次数：2;

1)浓度单位：mg/kg(样品中氧化苯丁锡的含量单位)；

m)进样体积：5 mL。

3.4.6.2 原子吸收测定

按照设定好的仪器测试条件，测定每份标准的测试溶液和试样的测试溶液的原子吸收吸光度。

3.4.7 空白试验

除不加试样外，均按上述测定步骤进行。

3.4.8 结果计算与表述

用原子吸收分光光度计的数据处理机，或按式(1)计算试样中氧化苯丁锡的残留量：

式中：X—试样中氧化苯丁锡残留量，mg/kg;

A—试样的原子吸收吸光度测定值；

A₀—空白试验原子吸收吸光度测定值；

k—标准曲线线性回归方程斜率，(mg/kg)。

4 方法的测定低限、回收率

4.1 测定低限

本方法的测定低限为0.10 mg/kg。

4.2 回收率

回收率的试验数据：试样中氧化苯丁锡的添加浓度在0.10～0.80 mg/kg范围时，回收率87.5％～110.0％。

相关链接：出口坚果中氧化苯丁锡残留量检验方法(一)

文章来源：《食品化妆品检验卷农药残留检测方法》

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