赭曲霉毒素A是由曲霉菌和青霉属菌株产生的一种有毒的真菌次级代谢产 物,广泛存在于谷物及谷物产品、香料和咖啡豆等产品中。赭曲霉毒素A具有很强 的肝脏和肾脏毒性,并有致畸、致突变和致癌作用,严重危害人类健康。赭曲霉毒素一般用薄层色谱、高效液相色谱法检测,但因其操作繁杂、费用昂贵而影响实际应用。

［采样地点］

农贸市场、大型超市等。

［样品］

预包装、散装形式的大米、豆类等食品。

［检测原理］

使用谷类中赭曲霉毒素的快速检测（ELlSA法）。此方法的原理是采用间接竞 争ELISA方法,在酶标板微孔条上预包被赭曲霉毒素抗原,样本中赭曲霉毒素和此 抗原竞争抗赭曲霉毒素的抗体（抗试剂），加入酶标二抗（酶标物）与抗赭曲霉毒素 抗体结合,再经（3,3'，,5,5'-四甲基联苯胺）（TMB）底物显色,样本吸光值与其含有的赭曲霉毒素成负相关,与标准品比较再乘以其对应的稀释倍数,即可得出样品 中赭曲霉毒素的含量。

［实验材料与设备］

（1）NCD- IOOA型多功能农产品安全分析仪（上海瑞鑫科技仪器有限公司）。

（2）赭曲霉毒素试剂盒（含酶标板、3倍标准品×5瓶、赭曲霉毒素抗试剂、赭 曲霉毒素酶标物、底物液A液、底物液B液、终止液、浓缩洗涤液、甲醇、石油醚、去离子水）。

（3）微量移液器 单道 20~200μL,200 ~1000μL。

（4）电子天平等。

［实验方法］

（1）溶液的配制分别配制洗涤工作液、样品提取液、5个不同浓度的标准 液等。

（2）样本前处理 粉碎并取5 g有代表性的样品,加入25 mL样品提取液,同时 加入2mL石油醚。

剧烈振荡5min ；于5000r/min离心5min ；取中间层用蒸馏水成倍稀释,即一份 中间层清液加一份蒸馏水;取稀释后液体待测。

(3)加标准品/样本加标准品/样本50uL到对应的微孔中,然后加赭曲霉毒素抗试剂50uL/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置25℃避光环境中反 应 30min。

(4)洗板 小心揭开盖板膜,将孔内液体甩干,用洗涤工作液300μL/孔,充分 洗涤5次,每次间隔30s,用吸水纸拍干(拍干后未被清除的气泡可用未使用过的枪 头戳破)。

(5)加酶标物加入赭曲霉毒素酶标物10uL/孔,轻轻振荡混匀,用盖板膜 盖板后置25℃避光环境中反应30min,取出重复洗板步骤(4)。

(6)显色 加入底物液A液50uL/孔,再加底物液B液50μl/孔,轻轻振荡混 匀，用盖板膜盖板后置室温避光环境反应15 ~20min。

(7)测定加入终止液50μL/孔，轻轻振荡混匀，设定酶标仪于双波长450/ 630nm检测,测定每孔OD值。

［结果评价］

根据我国现行有效的相关食品安全标准进行初步指标评价：

GB 2761-—2011《食品安全国家标准食品中真菌毒素限量》中食品中赭曲霉 毒素A限量指标。如果检测结果超过国家允许限量时,必须送有资质条件的质检 部门进行确认或裁决。

相关链接

(1)GB 5009.24—2010《食品安全国家标准 食品中黄曲霉毒素M1和B1的 测定》；

(2)GB/T 5009. 22—2003《食品中黄曲霉毒素B1的测定》；

(3)GB/T 5009. 23—2006《食品中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的测定》；

(4)GB/T 17480-2008《饲料中黄曲霉毒素B1的测定酶联免疫吸附法》；

(5)GB 1354—2009《大米》；

(6)GB/T 21126—2007《小麦粉与大米粉及其制品中甲醛次硫酸氢钠含量的 测定》;

(7)GB 2761-2011《食品安全国家标准食品中真菌毒素限量》；

(8)HG/T 2281-2006《次硫酸氢钠甲醛(吊白块)》。

相关链接：黄曲霉毒素的快速检测(ELlSA法)

文章来源：《食品快速检测实训教程》

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